https://www.tsbio.info/labowiki/index.php?action=history&feed=atom&title=%E3%82%AF%E3%83%AD%E3%83%BC%E3%83%8B%E3%83%B3%E3%82%B0_KOD_Plus 2026-04-05T13:48:55Z このウィキのこのページに関する変更履歴 MediaWiki 1.19.24 https://www.tsbio.info/labowiki/index.php?title=%E3%82%AF%E3%83%AD%E3%83%BC%E3%83%8B%E3%83%B3%E3%82%B0_KOD_Plus&diff=914&oldid=prev 2025-01-27T01:56:20Z

<p>ページの作成:「__NOTOC__ = PCR = {| class=&#039;wikitable&#039; |+ &#039;&#039;&#039;反応液の組成&#039;&#039;&#039; ! 試薬 !! 1サンプル分の量 !! 備考 |- |KOD Plus||style=&quot;text-align:right;&quot;| 1 µl || |- |KO...」</p> <p><b>新規ページ</b></p><div>__NOTOC__<br /> <br /> = PCR =<br /> <br /> {| class='wikitable'<br /> |+ '''反応液の組成'''<br /> ! 試薬 !! 1サンプル分の量 !! 備考<br /> |-<br /> |KOD Plus||style=&quot;text-align:right;&quot;| 1 µl ||<br /> |-<br /> |KOD Plus buffer ||style=&quot;text-align:right;&quot;| 5 µl ||<br /> |-<br /> |2 mM dNTP ||style=&quot;text-align:right;&quot;| 5 µl ||<br /> |-<br /> |25 mM MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; ||style=&quot;text-align:right;&quot;| 3 µl ||<br /> |- <br /> |プライマー||style=&quot;text-align:right;&quot;| 1 µMの場合、15 µl || 終濃度 0.3 µM<br /> |-<br /> |鋳型 DNA||style=&quot;text-align:right;&quot;| 1 µl ||<br /> |-<br /> |滅菌水||style=&quot;text-align:right;&quot;| up to 50 µl ||<br /> |-<br /> |合計||style=&quot;text-align:right;&quot;| 50 µl ||<br /> |}<br /> <br /> '''反応'''<br /> # 94℃ 2分<br /> # 98℃ 10秒、60℃ 30秒、68℃ 2分 (1 kbp / min) のサイクルを35回<br /> # 68℃ 7分<br /> # 4℃<br /> <br /> = In-Fusion =<br /> <br /> # PCR産物 1 µL、ベクター (pDONRをattL1とattL2で増幅したもの) 1.5 µL、Cloning Enhancer 1 µL を混合する。<br /> # 37℃ 15分、次いで80℃ 15分保温する。<br /> # 反応液 1 µL、In-Fusion 1 µL、H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 3 µLを混合する。<br /> # 50℃ 15分保温する。<br /> <br /> = 形質転換 =<br /> <br /> # DH5αを氷上で解凍する。<br /> # In-Fusion反応産物 1 µLを加えて 5分氷上で保温する。<br /> # 42℃で 45秒保温し、すぐ氷上に戻す。2分待つ。<br /> # SOCを 0.5 - 1 mL加え、37℃で 1h培養する。<br /> # 抗生物質入りの培地にプレーティングして、37℃ 1日暗所で培養する。</div>

157.110.120.101