種まき
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: 5. 1ml滅菌水で5回洗う。 | : 5. 1ml滅菌水で5回洗う。 | ||
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: 6. 上清をできる限り取り除き、等量の1% Agarを加え、懸濁する。 | : 6. 上清をできる限り取り除き、等量の1% Agarを加え、懸濁する。 | ||
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::'''''<span style="color:red">※ピペットを水平にして、種が流れないように注意</span>''''' | ::'''''<span style="color:red">※ピペットを水平にして、種が流れないように注意</span>''''' | ||
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2017年10月12日 (木) 11:38時点における最新版
形質転換体のシロイヌナズナの種を作製したムラシゲ・スクーグ培地にまく。
[編集] 用いる器具、試薬
- 5%ブリーチ液 : 次亜塩素酸ナトリウム 5ml、10% Triton 200μl/ 100ml
- 0.1% Agar
- 滅菌水
- ピペット (P-1000)
- チップ
- ビーカー
[編集] 実験方法
※種子は形質転換体のため実験台や床に落ちないように、A４の用紙の上に紙を置き、その上で作業すること
- 1. 種を数え、マイクロチューブに入れる。
- 2. 5% ブリーチ液を1ml加え、30秒間ボルテックス。
- 3. 10分間放置。20分を超えないように注意。
ここからはクリーンベンチ内で操作すること
※クリーンベンチ内に物を入れる場合は、必ず全てを70%エタノールで滅菌してから入れること
- 4. クリーンベンチ内で静置し、上清をビーカーに捨てる
- 5. 1ml滅菌水で5回洗う。
- 水を加え静置。種が沈んだら上清を捨てる。
- 6. 上清をできる限り取り除き、等量の1% Agarを加え、懸濁する。
- 7. 種を吸い上げ、チップを外す。
- ※ピペットを水平にして、種が流れないように注意
- 8. チップを持ち、一粒ずつ種を播く。
- 9. サージカルテープを巻き、プレートに日付、名前を書き、アルミホイルで覆う。
- アルミホイルにも日付、名前を書く
- 10. 4℃に2日程置いたら(春化処理)、グロースチャンバー(22℃)へ移す。
