種まき

2017年10月12日 (木) 11:38時点における最新版

形質転換体のシロイヌナズナの種を作製したムラシゲ・スクーグ培地にまく。

[編集] 用いる器具、試薬

• 5%ブリーチ液 : 次亜塩素酸ナトリウム 5ml、10% Triton 200μl/ 100ml
• 0.1% Agar
• 滅菌水
• ピペット (P-1000)
• チップ
• ビーカー

[編集] 実験方法

※種子は形質転換体のため実験台や床に落ちないように、A４の用紙の上に紙を置き、その上で作業すること

1. 種を数え、マイクロチューブに入れる。

2. 5% ブリーチ液を1ml加え、30秒間ボルテックス。

3. 10分間放置。20分を超えないように注意。　　　

ここからはクリーンベンチ内で操作すること

※クリーンベンチ内に物を入れる場合は、必ず全てを70%エタノールで滅菌してから入れること

4. クリーンベンチ内で静置し、上清をビーカーに捨てる

5. 1ml滅菌水で5回洗う。

水を加え静置。種が沈んだら上清を捨てる。

6. 上清をできる限り取り除き、等量の1% Agarを加え、懸濁する。

7. 種を吸い上げ、チップを外す。

※ピペットを水平にして、種が流れないように注意

8. チップを持ち、一粒ずつ種を播く。

9. サージカルテープを巻き、プレートに日付、名前を書き、アルミホイルで覆う。

アルミホイルにも日付、名前を書く

10. 4℃に2日程置いたら(春化処理)、グロースチャンバー(22℃)へ移す。