DNAの電気泳動

2017年10月13日 (金) 16:50時点における版

アガロースを使った電気泳動

用意するもの（全量20µの場合）

• 抽出したDNAサンプル １µℓ
• Might Amp　　　0.1µℓ　
• 2×MightAmp　Buffer　　10µℓ　
• プライマーmix　（2600,8600,8800,9350)　各2µℓ
• 水　　6.9µℓ
• １％アガロースゲル
• GR RED Loading buffer, 6X　1μℓ
• DNAマーカー　　4μℓ

サンプルDNAをPCRで増やす

1. 抽出したDNAサンプル、Might Amp、2×MightAmp　Buffer、プライマーMix、水の合計20μℓを8連マイクロチューブに20μピペットマンで入れ遠心する。
2. 必要数サンプルが出来たら20μサンプルをPCRにかけて反応させる。

95℃　5分

95℃　1分

70or75℃　1分

72℃　4分

72℃　7分

35サイクル

12℃　∞

PCRが終ったら4℃で1日保存する

増やしたDNAを電気泳動で確認する

1. 用意した１％アガロースゲルを電気泳動装置にセットし、1×TAEバッファーをゲルが浸るまで加える
2. アガロースゲルの一番左のウェルにDNAマーカー４μℓを20μピペットマンでアプライする。
3. 前日用意したPCR産物を別の8連マイクロチューブに4μℓ取りその中にGR RED Loading bufferを1μ加えて遠心する。（全量5μℓ）
4. できたサンプル5μℓ全量をアガロースゲルにそれぞれアプライする。
5. マーカー及びサンプルをすべてゲルにアプライしたら電気泳動を開始する（10分から20分程度）
6. 電気泳動が終了したらゲルを電気泳動装置から取り出しUV透過ゲルトレイに乗せ電気泳動ゲル撮影用デジタルカメラ遮光フード装置に持っていき撮影する。（結果を確認するまでゲルは捨てないこと）
7. 撮影したデータを持ってパソコンに保存、印刷する。