DNAの電気泳動
提供: 鈴木研Wiki
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(→用意するもの（全量20µの場合）) |
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*2×MightAmp Buffer 10µℓ | *2×MightAmp Buffer 10µℓ | ||
| − | + | *GR RED Loading buffer 6× | |
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====サンプルDNAをPCRで増やす==== | ====サンプルDNAをPCRで増やす==== | ||
#抽出したDNAサンプル、Might Amp、2×MightAmp Buffer、プライマーMix、水の合計20μℓを8連マイクロチューブに20μピペットマンで入れ遠心する。 | #抽出したDNAサンプル、Might Amp、2×MightAmp Buffer、プライマーMix、水の合計20μℓを8連マイクロチューブに20μピペットマンで入れ遠心する。 | ||
2017年10月13日 (金) 16:53時点における版
目次 |
アガロースを使った電気泳動
試薬
- 1×TAE（50×TAEを50倍希釈）
- TAKARA Agarose
- 2×MightAmp Buffer 10µℓ
- GR RED Loading buffer 6×
- DNAマーカー
サンプルDNAをPCRで増やす
- 抽出したDNAサンプル、Might Amp、2×MightAmp Buffer、プライマーMix、水の合計20μℓを8連マイクロチューブに20μピペットマンで入れ遠心する。
- 必要数サンプルが出来たら20μサンプルをPCRにかけて反応させる。
- 95℃ 5分
- 95℃ 1分
- 70or75℃ 1分
- 72℃ 4分
- 72℃ 7分
- 35サイクル
- 12℃ ∞
PCRが終ったら4℃で1日保存する
増やしたDNAを電気泳動で確認する
- 用意した１％アガロースゲルを電気泳動装置にセットし、1×TAEバッファーをゲルが浸るまで加える
- アガロースゲルの一番左のウェルにDNAマーカー４μℓを20μピペットマンでアプライする。
- 前日用意したPCR産物を別の8連マイクロチューブに4μℓ取りその中にGR RED Loading bufferを1μ加えて遠心する。（全量5μℓ）
- できたサンプル5μℓ全量をアガロースゲルにそれぞれアプライする。
- マーカー及びサンプルをすべてゲルにアプライしたら電気泳動を開始する（10分から20分程度）
- 電気泳動が終了したらゲルを電気泳動装置から取り出しUV透過ゲルトレイに乗せ電気泳動ゲル撮影用デジタルカメラ遮光フード装置に持っていき撮影する。（結果を確認するまでゲルは捨てないこと）
- 撮影したデータを持ってパソコンに保存、印刷する。
