イネ種子からのDNA抽出方法(～2015/8/23)
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=== 用いる器具、試薬 === | === 用いる器具、試薬 === | ||
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| − | * | + | * 米 1粒 |
| − | + | * PL1(buffer) 400ml | |
| − | * | + | * RNaseA(RNA分解酵素) 10μ |
| − | * | + | * PC 450μl |
| − | * | + | * PW1 400μl |
| − | * | + | * PW2 900μl |
| − | * | + | * PE 100μl |
| − | * | + | * メタルコーン 1個 |
| − | * | + | * 2mlサンプルチューブ 1個 |
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| + | * フィルター2種(<span style="color:purple">紫</span>・<span style="color:green">緑</span>) 各1個 | ||
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| + | * フィルター用チューブ 2個 | ||
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| + | * エッペン管 1個 | ||
=== 実験方法 === | === 実験方法 === | ||
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::* PL1(buffer) 400ml | ::* PL1(buffer) 400ml | ||
| − | ::* RNaseA(RNA分解酵素) 10μl | + | ::* RNaseA(RNA分解酵素) 10μl ''''' <span style="color:red">手袋着用</span> ''''' |
:: 以上の2つを入れて、ヒートブロック(65℃・10分)で熱処理する。 | :: 以上の2つを入れて、ヒートブロック(65℃・10分)で熱処理する。 | ||
| − | : 3. | + | : 3. 軽く遠心した後、<span style="color:purple">紫</span>のフィルターに入れ、遠心(11000xg・2分)し、<span style="color:purple">紫</span>のフィルターは破棄する。 |
: 4. ろ過したチューブに、 | : 4. ろ過したチューブに、 | ||
| − | :: PC 450μl | + | ::* PC 450μl |
| − | :: | + | :: を加えて、ピペッティングし、<span style="color:green">緑</span>のフィルターに2回に分けて入れ、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。 |
| − | : 5. | + | : 5. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、 |
| − | :: PW1 400μl | + | ::* PW1 400μl |
:: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。 | :: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。 | ||
| − | : 6. | + | : 6. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、 |
| − | :: PW2 700μl | + | ::* PW2 700μl |
:: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。 | :: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。 | ||
| − | : 7. | + | : 7. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、 |
| − | :: PW2 200μl | + | ::* PW2 200μl |
:: を加えて、遠心(11000xg・2分)し、残った液は破棄する。 | :: を加えて、遠心(11000xg・2分)し、残った液は破棄する。 | ||
| − | : 8. | + | : 8. <span style="color:green">緑</span>のフィルターを新しいエッペン管につけ、 |
| − | ::* PE 50μl | + | ::* PE 50μl |
:: を加え、ヒートブロック(65℃・5分)で熱処理後、遠心(11000xg・1分)する。 | :: を加え、ヒートブロック(65℃・5分)で熱処理後、遠心(11000xg・1分)する。 | ||
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: 9. もう一度 PE 50μl 加え、遠心(11000xg・1分)する。 | : 9. もう一度 PE 50μl 加え、遠心(11000xg・1分)する。 | ||
| − | :: | + | :: この結果、フィルターで精製されたDNAがエッペン管に溶出する。<span style="color:green">緑</span>のフィルターは破棄する。 |
2016年1月17日 (日) 15:28時点における最新版
イネ種子からDNA抽出し、精製する(～2015/6/16)
[編集] 用いる器具、試薬
- 米 1粒
- PL1(buffer) 400ml
- RNaseA(RNA分解酵素) 10μ
- PC 450μl
- PW1 400μl
- PW2 900μl
- PE 100μl
- メタルコーン 1個
- 2mlサンプルチューブ 1個
- フィルター2種(紫・緑) 各1個
- フィルター用チューブ 2個
- エッペン管 1個
[編集] 実験方法
- 1. 米とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れ、破砕機(2000rpm・30秒×2回)で砕く。
- 2. 異なるチューブに1.の上澄みと、
- PL1(buffer) 400ml
- RNaseA(RNA分解酵素) 10μl 手袋着用
- 以上の2つを入れて、ヒートブロック(65℃・10分)で熱処理する。
- 3. 軽く遠心した後、紫のフィルターに入れ、遠心(11000xg・2分)し、紫のフィルターは破棄する。
- 4. ろ過したチューブに、
- PC 450μl
- を加えて、ピペッティングし、緑のフィルターに2回に分けて入れ、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
- 5. 緑のフィルターに、
- PW1 400μl
- を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
- 6. 緑のフィルターに、
- PW2 700μl
- を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
- 7. 緑のフィルターに、
- PW2 200μl
- を加えて、遠心(11000xg・2分)し、残った液は破棄する。
- 8. 緑のフィルターを新しいエッペン管につけ、
- PE 50μl
- を加え、ヒートブロック(65℃・5分)で熱処理後、遠心(11000xg・1分)する。
- 9. もう一度 PE 50μl 加え、遠心(11000xg・1分)する。
- この結果、フィルターで精製されたDNAがエッペン管に溶出する。緑のフィルターは破棄する。
