イネ種子からのDNA抽出方法(~2015/8/23)

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::* PL1(buffer)  400ml
 
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::* RNaseA(RNA分解酵素)  10μl ''''' <span style="color:red">手袋着用</span> '''''
  
 
:: 以上の2つを入れて、ヒートブロック(65℃・10分)で熱処理する。
 
:: 以上の2つを入れて、ヒートブロック(65℃・10分)で熱処理する。
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: 4. ろ過したチューブに、
 
: 4. ろ過したチューブに、
  
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:: を加えて、ピペッティングし、<span style="color:green">緑</span>のフィルターに2回に分けて入れ、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
 
:: を加えて、ピペッティングし、<span style="color:green">緑</span>のフィルターに2回に分けて入れ、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
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: 5. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、
 
: 5. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、
  
:: PW1  400μl
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::* PW1  400μl
  
 
:: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
 
:: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
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: 6. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、
 
: 6. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、
  
:: PW2  700μl
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::* PW2  700μl
  
 
:: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
 
:: を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。
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: 7. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、
 
: 7. <span style="color:green">緑</span>のフィルターに、
  
:: PW2  200μl
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::* PW2  200μl
  
 
:: を加えて、遠心(11000xg・2分)し、残った液は破棄する。
 
:: を加えて、遠心(11000xg・2分)し、残った液は破棄する。

2016年1月17日 (日) 15:28時点における最新版

イネ種子からDNA抽出し、精製する(~2015/6/16)

[編集] 用いる器具、試薬


  • 米 1粒
  • PL1(buffer) 400ml
  • RNaseA(RNA分解酵素) 10μ
  • PC 450μl
  • PW1 400μl
  • PW2 900μl
  • PE 100μl
  • メタルコーン 1個
  • 2mlサンプルチューブ 1個
  • フィルター2種() 各1個
  • フィルター用チューブ 2個
  • エッペン管 1個

[編集] 実験方法


1. 米とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れ、破砕機(2000rpm・30秒×2回)で砕く。
2. 異なるチューブに1.の上澄みと、
  • PL1(buffer) 400ml
  • RNaseA(RNA分解酵素) 10μl 手袋着用
以上の2つを入れて、ヒートブロック(65℃・10分)で熱処理する。


3. 軽く遠心した後、のフィルターに入れ、遠心(11000xg・2分)し、のフィルターは破棄する。


4. ろ過したチューブに、
  • PC 450μl
を加えて、ピペッティングし、のフィルターに2回に分けて入れ、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。


5. のフィルターに、
  • PW1 400μl
を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。


6. のフィルターに、
  • PW2 700μl
を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。


7. のフィルターに、
  • PW2 200μl
を加えて、遠心(11000xg・2分)し、残った液は破棄する。


8. のフィルターを新しいエッペン管につけ、
  • PE 50μl
を加え、ヒートブロック(65℃・5分)で熱処理後、遠心(11000xg・1分)する。


9. もう一度 PE 50μl 加え、遠心(11000xg・1分)する。
この結果、フィルターで精製されたDNAがエッペン管に溶出する。のフィルターは破棄する。
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