MultiNAを使った電気泳動
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| + | 解析するDNA断片の長さに合わせて、「DNA-500（水色）」「DNA-2500（紫色）」「DNA-12000（赤色）」のうち適切なキットを選び、それに合わせた試薬を用いる | ||
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| + | *(A) ラダー ：(2)で希釈したものを使う（-20℃） | ||
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| − | |MultiNA用試薬||ラダー | + | |MultiNA用試薬||ラダー|| |
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| − | |DNA-500|| | + | |DNA-500||pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII))||※25bp DNA ラダー から変更 |
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| − | |DNA-2500||pGEM DNA Markers | + | |DNA-2500||pGEM DNA Markers|| |
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| − | |DNA-12000||2-Log DNA Ladder (0.1-10.0 kbp) | + | |DNA-12000||2-Log DNA Ladder (0.1-10.0 kbp)|| |
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| − | *希釈色素液 SYBR | + | *(B) 希釈色素液 SYBR Gold ：(2)で希釈したものを使う（-20℃） |
| − | *DNA | + | *(C) DNA マーカー溶液 ：サイズに合わせたものを使用（-20℃） |
| − | *DNA | + | *(D) DNA 分離バッファ ：サイズに合わせたものを使用 (4℃) |
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| + | ==(2) ストック溶液の作成== | ||
| + | * (A) ラダーを希釈する (希釈したラダーは-20℃で保存する) | ||
| + | # pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII)) はTEで50倍に希釈する。 | ||
| + | # 2-Log DNA Ladder はTEで100倍に希釈する。 | ||
| + | # pGEM DNA Markers はTEで100倍に希釈する。 | ||
| − | + | * (B) 希釈色素液 | |
| − | * 希釈色素液 | + | |
# SYBR Gold 1µlとTE 99µlを混ぜ合わせる。 | # SYBR Gold 1µlとTE 99µlを混ぜ合わせる。 | ||
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# -20℃で保存する。 | # -20℃で保存する。 | ||
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| − | ==使用時に調整するもの== | + | |
| + | ==(3) 使用時に調整するもの== | ||
* 希釈色素液を分離バッファーで100倍に希釈する。必要量はサンプルを設定した後計算されるが、以下を参考に調整してもよい。 | * 希釈色素液を分離バッファーで100倍に希釈する。必要量はサンプルを設定した後計算されるが、以下を参考に調整してもよい。 | ||
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|} | |} | ||
| − | ==使用方法== | + | ==(4) 使用方法== |
# 本体の電源を入れる。 | # 本体の電源を入れる。 | ||
# 制御用コンピュータを起動する。MultiNAユーザーでログインして、MultiNA装置制御を起動する。 | # 制御用コンピュータを起動する。MultiNAユーザーでログインして、MultiNA装置制御を起動する。 | ||
# 制御ソフトの左上のMultiNAの文字がオレンジのときは本体と通信できていないのでメニューの「装置」-「接続」を実行する。 | # 制御ソフトの左上のMultiNAの文字がオレンジのときは本体と通信できていないのでメニューの「装置」-「接続」を実行する。 | ||
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| + | * 洗浄水の量を確認する。足りないときはミリQ水を補充する。 | ||
| + | * 廃液が一杯になっていないか確認する。廃液はシンクに流す。 | ||
=== クリーニング === | === クリーニング === | ||
# 前日使用していないときは全チップクリーニングをする。そうでないときはチップ洗浄を行う(2回)。 | # 前日使用していないときは全チップクリーニングをする。そうでないときはチップ洗浄を行う(2回)。 | ||
| − | ::* | + | ::* チップクリーニング液＝Cleaning Solution RA （試薬棚） |
| − | ::* | + | ::* チップ4枚、2回洗浄の場合：クリーニング液使用量＝2.6ml。所要時間＝70分。 |
=== 測定 === | === 測定 === | ||
:1. 制御ソフトでサンプルの登録を行う。 | :1. 制御ソフトでサンプルの登録を行う。 | ||
| − | :: | + | ::MultiNA画面の「新規登録」をクリック |
| − | :: | + | ::使用するプロジェクト（キット、マーカー溶液の混合方法）を選択しOKをクリック |
::ウェルをクリック（緑色に変わる） | ::ウェルをクリック（緑色に変わる） | ||
::▶▶をクリック | ::▶▶をクリック | ||
::サンプル名を入力 | ::サンプル名を入力 | ||
::登録をクリック | ::登録をクリック | ||
| − | :2. | + | :2. 必要な分離バッファーとマーカーの量が表示されるので、分離バッファー（希釈色素液と混合したもの）は専用のチューブに、マーカーは0.5mlチューブに分注して、 |
::それぞれの蓋を開けて所定の位置に設置する。分離バッファーとマーカーのラベルの色と装置内の置き場所の色が同じ。 | ::それぞれの蓋を開けて所定の位置に設置する。分離バッファーとマーカーのラベルの色と装置内の置き場所の色が同じ。 | ||
| + | ::*分離バッファーは多めに作る。（足らない場合、ラン開始時にエラーが出る） | ||
:3. 自分のサンプルをセットする。サンプルは5µl以上必要で、そのうち1µlが使用される。 | :3. 自分のサンプルをセットする。サンプルは5µl以上必要で、そのうち1µlが使用される。 | ||
:4. ラダーもセットする。ラダーは12µl程度必要。 | :4. ラダーもセットする。ラダーは12µl程度必要。 | ||
:5. サンプルを固定するための金属の網をかぶせる。 | :5. サンプルを固定するための金属の網をかぶせる。 | ||
:6. 蓋をする。 | :6. 蓋をする。 | ||
| − | :7. | + | :7. 制御用ソフトでランを開始する（▶をクリック）。泳動終了後に自動で洗浄を2回行うようにしておく。 |
=== 後片付け === | === 後片付け === | ||
# 一日の最後に全チップクリーニングを行う。チップクリーニングを行ったまま帰宅してよい。 | # 一日の最後に全チップクリーニングを行う。チップクリーニングを行ったまま帰宅してよい。 | ||
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| + | === データの解析 === | ||
| + | # データは自動で保存される。保存場所は、デスクトップのショートカット「MultiNA-Project」内。プロジェクト毎のフォルダ内にファイル名＝分析日時のファイルが作られる。あとは、MultiNA Viewerで解析する | ||
2019年12月9日 (月) 10:52時点における版
目次 |
MultiNAを使った電気泳動
(1) 試薬
解析するDNA断片の長さに合わせて、「DNA-500（水色）」「DNA-2500（紫色）」「DNA-12000（赤色）」のうち適切なキットを選び、それに合わせた試薬を用いる
- (A) ラダー ：(2)で希釈したものを使う（-20℃）
| MultiNA用試薬 | ラダー | |
| DNA-500 | pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII)) | ※25bp DNA ラダー から変更 |
| DNA-2500 | pGEM DNA Markers | |
| DNA-12000 | 2-Log DNA Ladder (0.1-10.0 kbp) |
- (B) 希釈色素液 SYBR Gold ：(2)で希釈したものを使う（-20℃）
- (C) DNA マーカー溶液 ：サイズに合わせたものを使用（-20℃）
- (D) DNA 分離バッファ ：サイズに合わせたものを使用 (4℃)
(2) ストック溶液の作成
- (A) ラダーを希釈する (希釈したラダーは-20℃で保存する)
- pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII)) はTEで50倍に希釈する。
- 2-Log DNA Ladder はTEで100倍に希釈する。
- pGEM DNA Markers はTEで100倍に希釈する。
- (B) 希釈色素液
- SYBR Gold 1µlとTE 99µlを混ぜ合わせる。
- -20℃で保存する。
(3) 使用時に調整するもの
- 希釈色素液を分離バッファーで100倍に希釈する。必要量はサンプルを設定した後計算されるが、以下を参考に調整してもよい。
| 合計分析数 | 8分析以下 | 9-29分析 | 30-79分析 | 80-120分析 |
| 分離バッファーの量 (µl) | 495 | 990 | 1980 | 2970 |
| 希釈色素液の量 (µl) | 5 | 10 | 20 | 30 |
(4) 使用方法
- 本体の電源を入れる。
- 制御用コンピュータを起動する。MultiNAユーザーでログインして、MultiNA装置制御を起動する。
- 制御ソフトの左上のMultiNAの文字がオレンジのときは本体と通信できていないのでメニューの「装置」-「接続」を実行する。
- 洗浄水の量を確認する。足りないときはミリQ水を補充する。
- 廃液が一杯になっていないか確認する。廃液はシンクに流す。
クリーニング
- 前日使用していないときは全チップクリーニングをする。そうでないときはチップ洗浄を行う(2回)。
- チップクリーニング液＝Cleaning Solution RA （試薬棚）
- チップ4枚、2回洗浄の場合：クリーニング液使用量＝2.6ml。所要時間＝70分。
測定
- 1. 制御ソフトでサンプルの登録を行う。
- MultiNA画面の「新規登録」をクリック
- 使用するプロジェクト（キット、マーカー溶液の混合方法）を選択しOKをクリック
- ウェルをクリック（緑色に変わる）
- ▶▶をクリック
- サンプル名を入力
- 登録をクリック
- 2. 必要な分離バッファーとマーカーの量が表示されるので、分離バッファー（希釈色素液と混合したもの）は専用のチューブに、マーカーは0.5mlチューブに分注して、
- それぞれの蓋を開けて所定の位置に設置する。分離バッファーとマーカーのラベルの色と装置内の置き場所の色が同じ。
- 分離バッファーは多めに作る。（足らない場合、ラン開始時にエラーが出る）
- それぞれの蓋を開けて所定の位置に設置する。分離バッファーとマーカーのラベルの色と装置内の置き場所の色が同じ。
- 3. 自分のサンプルをセットする。サンプルは5µl以上必要で、そのうち1µlが使用される。
- 4. ラダーもセットする。ラダーは12µl程度必要。
- 5. サンプルを固定するための金属の網をかぶせる。
- 6. 蓋をする。
- 7. 制御用ソフトでランを開始する（▶をクリック）。泳動終了後に自動で洗浄を2回行うようにしておく。
後片付け
- 一日の最後に全チップクリーニングを行う。チップクリーニングを行ったまま帰宅してよい。
データの解析
- データは自動で保存される。保存場所は、デスクトップのショートカット「MultiNA-Project」内。プロジェクト毎のフォルダ内にファイル名＝分析日時のファイルが作られる。あとは、MultiNA Viewerで解析する
