～2015/6/16 までのもの
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(ページの作成:「イネ種子からDNA抽出し、精製する(～2015/6/16) === 用いる器具、試薬 === ---- * 米 1粒 * PL1(buffer) 400ml * RNaseA(RNA分解酵素) 10μ * ...」) |
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イネ種子からDNA抽出し、精製する(～2015/6/16) | イネ種子からDNA抽出し、精製する(～2015/6/16) | ||
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| − | * | + | * PL1 400μl |
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| − | * | + | * PW1 400μl |
| − | * | + | * PW2 900μl |
| − | * | + | * PE 100μl |
| − | * | + | * RNaseA 10μl |
| − | + | '''器具''' | |
| − | * メタルコーン | + | * メタルコーン 1つ |
| − | * | + | * フィルター 2種類 (<span style="color:purple">紫</span> ・<span style="color:green">緑</span> ) |
| − | * | + | * エッペン管 1個 |
| − | * | + | * 20μl用ピペットマン |
| − | * | + | * 200μl用ピペットマン |
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| − | + | * MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI) | |
| − | + | * ヒートブロック | |
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| + | 1. 米粒(一粒)とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れて、MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)を用いて2000rpmで20秒×2回サンプルを破砕する | ||
| − | + | 2. PL1 400μl と RNaseA 10μl を加える''''' <span style="color:red">注意：手袋着用して行うこと</span> ''''' | |
| − | + | 3. ヒートブロック(65℃)で10分熱処理し、軽く遠心する | |
| − | : | + | 4. ピペットマンを使用して内液をフィルター'''(<span style="color:purple">紫</span>)'''に流しいれ、遠心分離機(11000xg)で2分遠心する |
| + | 5. フィルターの'''<span style="color:red">上(層部分)</span>''' を捨て、下(液部分)に PC 450μl を加え、ピペッティングする | ||
| − | + | 6. ピペットマンで新しいフィルター'''(<span style="color:green">緑</span>)'''に流しいれ、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する''''' <span style="color:red">注意：液量が多いため、2回に分けること</span> ''''' | |
| − | + | 7. PW1 400μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する | |
| − | + | 8. PW2 700μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する | |
| + | 9. PW2 200μl を加え、遠心分離機(11000xg)で2分遠心する | ||
| − | + | ''''' <span style="color:blue">フィルターの下(液部分)があふれるため、6～9の各工程が終わり次第、液を廃棄すること</span> ''''' | |
| − | : | + | 10. フィルターの'''<span style="color:red">下(液部分)</span>''' を捨て、上(層部分)をエッペン管につける |
| − | + | 11. PE 50μl を加える | |
| + | 12. ヒートブロック(65℃)で5分熱処理し、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する | ||
| − | + | 13. PE 50μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する | |
| − | + | 14. フィルターを捨て、エッペン管を冷凍保存する。 | |
2016年1月17日 (日) 15:35時点における最新版
イネ種子からDNA抽出し、精製する(～2015/6/16)
[編集] 用いる器具・試薬
試料・試薬
- 米粒 1粒
- PL1 400μl
- PC 450μl
- PW1 400μl
- PW2 900μl
- PE 100μl
- RNaseA 10μl
器具
- メタルコーン 1つ
- フィルター 2種類 (紫 ・緑 )
- エッペン管 1個
- 20μl用ピペットマン
- 200μl用ピペットマン
- 1000μl用ピペットマン
- MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)
- ヒートブロック
- 遠心分離機
[編集] 実験方法
1. 米粒(一粒)とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れて、MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)を用いて2000rpmで20秒×2回サンプルを破砕する
2. PL1 400μl と RNaseA 10μl を加える 注意：手袋着用して行うこと
3. ヒートブロック(65℃)で10分熱処理し、軽く遠心する
4. ピペットマンを使用して内液をフィルター(紫)に流しいれ、遠心分離機(11000xg)で2分遠心する
5. フィルターの上(層部分) を捨て、下(液部分)に PC 450μl を加え、ピペッティングする
6. ピペットマンで新しいフィルター(緑)に流しいれ、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する 注意：液量が多いため、2回に分けること
7. PW1 400μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する
8. PW2 700μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する
9. PW2 200μl を加え、遠心分離機(11000xg)で2分遠心する
フィルターの下(液部分)があふれるため、6～9の各工程が終わり次第、液を廃棄すること
10. フィルターの下(液部分) を捨て、上(層部分)をエッペン管につける
11. PE 50μl を加える
12. ヒートブロック(65℃)で5分熱処理し、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する
13. PE 50μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する
14. フィルターを捨て、エッペン管を冷凍保存する。
