イネ種子からのDNA抽出方法
提供: 鈴木研Wiki
(版間での差分)
(ページの作成:「====用いる器具・試薬==== ---- '''試料・試薬''' * 米粒 1粒 * PL1 400μl * PC 450μl * PW1 400μl * PW2 900μl * PE 100μl * RNaseA 10μl '''器...」) |
|||
| 1行: | 1行: | ||
| + | イネ種子からDNA抽出し、精製する | ||
| + | |||
====用いる器具・試薬==== | ====用いる器具・試薬==== | ||
---- | ---- | ||
| 4行: | 6行: | ||
* 米粒 1粒 | * 米粒 1粒 | ||
| − | * | + | * SolⅠ 200μl |
| − | * | + | * SolⅡ 20μl |
| − | * | + | * SolⅢ 75μl |
| − | * | + | * クロロホルム 100μl |
| − | * | + | * イソプロパノール 100μl |
| − | * | + | * 70％エタノール 100μl |
| + | |||
| + | * H2O 100μl | ||
'''器具''' | '''器具''' | ||
* メタルコーン 1つ | * メタルコーン 1つ | ||
| − | |||
| − | |||
* エッペン管 1個 | * エッペン管 1個 | ||
| + | |||
| + | * 2mlサンプルチューブ 1個 | ||
* 20μl用ピペットマン | * 20μl用ピペットマン | ||
| 40行: | 44行: | ||
1. 米粒(一粒)とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れて、MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)を用いて2000rpmで20秒×2回サンプルを破砕する | 1. 米粒(一粒)とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れて、MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)を用いて2000rpmで20秒×2回サンプルを破砕する | ||
| − | 2. | + | 2. SolⅠ 200μl と SolⅡ 20μl と SolⅢ 75μl を加え、その都度、ボルテックスを行う |
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | ||
| − | + | 3. ヒートブロック(50℃)で15分熱処理する | |
| − | + | 4. クロロホルム 100μl を加え、遠心分離機(15000rpm)で5分遠心する | |
| − | + | 5. 上澄み液をエッペン管に回収し、イソプロパノール 100μl を加え、ボルテックス後、遠心分離機(15000rpm)で15分遠心する | |
| − | + | 6. 70％エタノール 100μl を加え、遠心分離機(15000rpm)で5分遠心する | |
| − | + | 7. 液層を吸い出し、H2O 100μlを加え、１晩冷蔵保存する | |
| − | + | 8. 冷凍保存する | |
2016年1月17日 (日) 15:56時点における最新版
イネ種子からDNA抽出し、精製する
[編集] 用いる器具・試薬
試料・試薬
- 米粒 1粒
- SolⅠ 200μl
- SolⅡ 20μl
- SolⅢ 75μl
- クロロホルム 100μl
- イソプロパノール 100μl
- 70％エタノール 100μl
- H2O 100μl
器具
- メタルコーン 1つ
- エッペン管 1個
- 2mlサンプルチューブ 1個
- 20μl用ピペットマン
- 200μl用ピペットマン
- 1000μl用ピペットマン
- MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)
- ヒートブロック
- 遠心分離機
[編集] 実験方法
1. 米粒(一粒)とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れて、MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)を用いて2000rpmで20秒×2回サンプルを破砕する
2. SolⅠ 200μl と SolⅡ 20μl と SolⅢ 75μl を加え、その都度、ボルテックスを行う
3. ヒートブロック(50℃)で15分熱処理する
4. クロロホルム 100μl を加え、遠心分離機(15000rpm)で5分遠心する
5. 上澄み液をエッペン管に回収し、イソプロパノール 100μl を加え、ボルテックス後、遠心分離機(15000rpm)で15分遠心する
6. 70％エタノール 100μl を加え、遠心分離機(15000rpm)で5分遠心する
7. 液層を吸い出し、H2O 100μlを加え、１晩冷蔵保存する
8. 冷凍保存する
