DNAの電気泳動
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==試薬== | ==試薬== | ||
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*1×TAE（50×TAEを50倍希釈） | *1×TAE（50×TAEを50倍希釈） | ||
*TAKARA Agarose | *TAKARA Agarose | ||
| − | *GR RED Loading buffer 6× | + | *10x泳動Dye （"10xDye buffer"："GR RED Loading buffer 6×"＝2:1で混ぜたもの） |
| − | * | + | *DNAサイズマーカー（例：λ/HindIII） |
==アガロースゲルの作製== | ==アガロースゲルの作製== | ||
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::* (目安) 1kb以下：1.5%、1kb以上：0.7% | ::* (目安) 1kb以下：1.5%、1kb以上：0.7% | ||
| − | # | + | #ゲルトレイ（ケース、トレイ、コーム）を準備する。 |
| − | # | + | #ゲルトレイのサイズに応じたTAEをゲル作製用ビーカーに分注する。 ※Mupid（大：2枚、小：4枚）の場合、200ml |
#アガロースを量って入れる。 | #アガロースを量って入れる。 | ||
#電子レンジでアガロースを完全に溶かす。 | #電子レンジでアガロースを完全に溶かす。 | ||
#水道水でアガロース溶液を素手で持てるぐらいまで冷やす。 | #水道水でアガロース溶液を素手で持てるぐらいまで冷やす。 | ||
| − | # | + | #トレイにアガロースを流し込む。ケースとトレイの間の空気を抜く。コームをさす。 |
#固まるのを待つ。すぐに使わない場合は、固まってから冷蔵庫で保存 | #固まるのを待つ。すぐに使わない場合は、固まってから冷蔵庫で保存 | ||
==電気泳動== | ==電気泳動== | ||
| − | # | + | #サンプルと「10x泳動Dye」（サンプルの1/10量）を混ぜる |
| − | + | #泳動層にゲル（ゲル板はつけたまま）を入れ、TAEを満たす。 | |
| − | # | + | #各ウェルに、「サイズマーカー（例：λ/HindIII）」4µl、あるいは、上記で調製したサンプルをアプライし、100Vで泳動する。 |
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#泳動が終了したら、ゲルをUV透過ゲルトレイに乗せ、トランスイルミネーターでDNAを可視化する。写真を撮る。 | #泳動が終了したら、ゲルをUV透過ゲルトレイに乗せ、トランスイルミネーターでDNAを可視化する。写真を撮る。 | ||
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2020年4月9日 (木) 17:23時点における最新版
[編集] アガロースを使った電気泳動
[編集] 試薬
- 1×TAE（50×TAEを50倍希釈）
- TAKARA Agarose
- 10x泳動Dye （"10xDye buffer"："GR RED Loading buffer 6×"＝2:1で混ぜたもの）
- DNAサイズマーカー（例：λ/HindIII）
[編集] アガロースゲルの作製
| アガロースの濃度(W/V) | DNAのサイズ(bp) |
| 0.6% | 1,000～20,000 |
| 0.7% | 800～10,000 |
| 1.0% | 500～7,000 |
| 1.2% | 400～6,000 |
| 1.5% | 200～3,000 |
| 2.0% | 100～2,000 |
- (目安) 1kb以下：1.5%、1kb以上：0.7%
- ゲルトレイ（ケース、トレイ、コーム）を準備する。
- ゲルトレイのサイズに応じたTAEをゲル作製用ビーカーに分注する。 ※Mupid（大：2枚、小：4枚）の場合、200ml
- アガロースを量って入れる。
- 電子レンジでアガロースを完全に溶かす。
- 水道水でアガロース溶液を素手で持てるぐらいまで冷やす。
- トレイにアガロースを流し込む。ケースとトレイの間の空気を抜く。コームをさす。
- 固まるのを待つ。すぐに使わない場合は、固まってから冷蔵庫で保存
[編集] 電気泳動
- サンプルと「10x泳動Dye」（サンプルの1/10量）を混ぜる
- 泳動層にゲル（ゲル板はつけたまま）を入れ、TAEを満たす。
- 各ウェルに、「サイズマーカー（例：λ/HindIII）」4µl、あるいは、上記で調製したサンプルをアプライし、100Vで泳動する。
- 泳動が終了したら、ゲルをUV透過ゲルトレイに乗せ、トランスイルミネーターでDNAを可視化する。写真を撮る。
