MultiNAを使った電気泳動

2021年1月15日 (金) 13:03時点における最新版

[編集] (1) 装置の起動

1. 本体の電源を入れる。
2. 制御用コンピュータを起動する。MultiNAユーザーでログインして、MultiNA装置制御を起動する。
3. 制御ソフトの左上の「MultiNA」の文字が緑色になっていればOK。

• オレンジのときは本体と通信できていないのでメニューの「装置」-「接続」を実行する。

• 洗浄水の量を確認する。足りないときはElix水を補充する。

• 洗浄水が足らないとチップが詰まってしまうので、毎回のラン開始時、あるいは洗浄・クリーニング開始時には、必ずチェックする！

• 廃液が一杯になっていないか、廃液チューブが正しくセットされているかを確認する。廃液はシンクに流す。

[編集] (2) クリーニング

前日に使用していない場合は、全チップクリーニングをする。（※前日に使用している場合は、チップ洗浄を行う(2回:全チップ)）

「装置」タブ → 「チップクリーニング」 → 「全チップ」　

• チップクリーニング液＝Cleaning Solution RA　（試薬棚）
• チップ4枚、2回洗浄の場合：クリーニング液使用量＝2.6ml（容器のラインまで）。所要時間＝70分。

[編集] (3) 試薬の解凍

• クリーニングを待っている間に、試薬を実験台の上に出して室温に戻しておく

• 解析するDNA断片の長さに合わせて、「DNA-500（水色）」「DNA-2500（紫）」「DNA-12000（ピンク）」のうち適切なキットを選ぶ。

以下は、500bp以下のDNA断片を解析する際の「DNA-500（水色）」についての説明。

• ストック溶液の作製方法、「DNA-2500（紫）」「DNA-12000（ピンク）」の対応試薬は、末尾の「補足」を参照）

• ラダー：pUC19/MspI(HpaII)　※調整済みの希釈液を使う（-20℃で保存）
• 希釈色素液 SYBR Gold　（-20℃で保存）
• DNA マーカー溶液　：DNA-500用（水色）を使用（-20℃で保存）
• DNA 分離バッファ　：DNA-500用（水色）を使用 (4℃で保存)

[編集] (4) 測定

1. 制御ソフトでサンプルの登録を行う。

1) MultiNA画面の「新規登録」をクリック

2) 使用するプロジェクト（キット、マーカー溶液の混合方法）を選択しOKをクリック

• 「DNA-500」での解析には、基本的に「DNA-500_On-chip_1901」を使う

3) サンプルを配置するウェルをクリック（緑色に変わる）

4) ▶▶をクリック

5) （各ウェルのサンプル名を入力）

6) 登録をクリック

2. 分離バッファーとマーカーの必要量が表示されるので、調製して設置する。

[編集] (試薬の調整方法)

• MultiNA装置の下の引き出しにある、試薬調製用のチューブを使う

• ラダー＝pUC19/MspI(HpaII) : ラダー用チューブ(200ulチューブ)に、 12µl 分注する
• DNA マーカー溶液　：マーカー用0.5mlチューブに、 表示された量＋10µl 分注する
• DNA 分離バッファ　：DNA分離バッファには、希釈色素液を100分の1量添加する

(1)分離バッファ用チューブに、「希釈色素液」を DNA分離バッファの 表示量の100分の1 入れる

(2)そこへ、DNA分離バッファを 表示量＋100µl 入れる。（粘性が高いので注意！）

(3)チューブの蓋をして、ボルテックスで懸濁する。（泡ができたら、ピペットマンのチップで突いて消す）

泡立ちやすいので、ピペッティングはしない

• 分離バッファーは多めに作る。（足らない場合、ラン開始時にエラーが出る）

（分離バッファ調製量の目安）

合計分析数	8分析以下	9-29分析	30-79分析	80-120分析
分離バッファーの量 (µl)	495	990	1980	2970
希釈色素液の量 (µl)	5	10	20	30

• 調製した試薬は、MultiNA装置の蓋を開けて所定の位置に設置する。

• 分離バッファーとマーカーは、ラベルの色と装置内の置き場所の色が同じ（DNA-500の場合、水色）。

3. 自分のサンプルをセットする。サンプルは5µl以上必要で、そのうち1µlが使用される。

4. サンプルを固定するための金属の網をかぶせる。

5. MultiNA装置の蓋をする。

6. 制御用ソフトでランを開始する（▶をクリック）。泳動終了後に自動で洗浄を2回行うようにしておく。

• 分離バッファー等の量が足らない場合、ラン開始してしばらく後にエラーが出る。その場合、補充したうえで再度ランを開始する

[編集] (5) 後片付け

• 一日の最後に全チップクリーニングを行う。チップクリーニングを行ったまま帰宅してよい（翌日に片付ける）。
  • 装置内にセットしたチューブをすべて回収。装置本体の電源を切る。
• 分離バッファー、マーカー、ラダーの容器は水洗いして、風乾。

[編集] (6) データの解析

データは自動で保存される。「MultiNA Viewer」で解析する

• (保存場所) デスクトップのショートカット「MultiNA-Project」内のプロジェクト毎のフォルダ内。登録時の日付が付いたファイルが作られる。

[編集] ※ 補足（各キットとラダーの対応、ストック溶液の作製方法）

• 解析するDNA断片の長さに合わせて、「DNA-500（水色）」「DNA-2500（紫）」「DNA-12000（ピンク）」のうち適切なキットを選ぶ。

[編集] (1) ラダー

：キットに合わせて下記から選択。(2)で希釈したものを使う（-20℃で保存）

[編集] (2) ストック溶液の作製

• (A) ラダーの希釈

1. (DNA-500) pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII)) はTEで50倍に希釈する。
2. (DNA-2500) pGEM DNA Markers はTEで100倍に希釈する。
3. (DNA-12000) 2-Log DNA Ladder はTEで100倍に希釈する。

• (B) 希釈色素液

1. SYBR Gold 1µlとTE 99µlを混ぜ合わせる。