NucleoSpin RNA Plantを使ったRNA抽出
提供: 鈴木研Wiki
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2021年3月19日 (金) 11:14時点における最新版
[編集] 試薬
- Wash Buffer RA3に48 ml エタノールを入れる
- rDNaseにRNase-free H2O 550 µlを加える。エッペンに分注し-20℃で保存
[編集] 手順
- 100 mgまでのサンプルを乳鉢にいれ、液体窒素で凍結する。乳棒を使ってすり潰す。
- RA1を350 µl加える。βメルカプトエタノールを3.5 µl加える。乳棒でよく混ぜる。
- すり潰したサンプルをNucleoSpin Filter (紫色)に移し、11,000 gで1分間遠心する。上清を新しい1.5 mlチューブに移す。
- 70%エタノールを350 µl加え、よく混ぜる。
- サンプルをNucleoSpin RNA Plant Column (水色)に移し、11,000 gで30秒間遠心する。下のチューブを捨て、新しいCollection Tubeにカラムを移す。
- MDBを350 µl加え、11,000 gで1分間遠心する。次のDNaseによる反応を効率よく行うために、カラムの底のメンブレンが乾くようにする。
- rDNase 10 µlとReaction Buffer for rDNase 90 µlを混ぜ、カラムに加える。室温で15分間保温。
- RAWを200 µlカラムにいれる。11,000 gで30秒間遠心する。新しいCollection Tubeに移す。
- RA3を600 µlカラムに入れる。11,000 gで30秒間遠心する。液を捨てる。
- RA3を250 µlカラムに入れる。11,000 gで2分間遠心する。新しい1.5 mlチューブにに移す。
- RNase-free H2Oを60 µlカラムに入れ、11,000 gで1分間遠心する。
- RNAは-80℃で保存する。
