DNAの定量 (Promega QuantiFluor)
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また蛍光を用いるので吸光度よりはるかに高感度である(微量でも正確に測れる)。 | また蛍光を用いるので吸光度よりはるかに高感度である(微量でも正確に測れる)。 | ||
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# 100 ng/µl λDNAを水または適当なバッファーで10倍に希釈して 10 ng/µl を作成する。20 µl程度あればよい。 | # 100 ng/µl λDNAを水または適当なバッファーで10倍に希釈して 10 ng/µl を作成する。20 µl程度あればよい。 | ||
# 同様に10 ng/µl から 1 ng/µl を作成する。 | # 同様に10 ng/µl から 1 ng/µl を作成する。 | ||
# 100, 10, 1 ng/µl それぞれを2倍に希釈して 50, 5, 0.5 ng/µl を作成する。それぞれ10 µl程度あればよい。 | # 100, 10, 1 ng/µl それぞれを2倍に希釈して 50, 5, 0.5 ng/µl を作成する。それぞれ10 µl程度あればよい。 | ||
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# 以下を混ぜる | # 以下を混ぜる | ||
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2016年10月26日 (水) 11:27時点における最新版
[編集] DNA定量の原理
Promega社のQuantiFlourはDNAに特異的な蛍光色素を使ってDNAを定量する。
QuantiFlourに使われている蛍光色素はdsDNA (double stranded DNA 二本鎖DNA)と特異的に結合して蛍光を発する。 dsDNAと特異的に作用するため、不純物の影響を受けにくいのが最大の利点である。
また蛍光を用いるので吸光度よりはるかに高感度である(微量でも正確に測れる)。
[編集] 試薬
- Promega社 QuantiFluor dsDNA System
- 20x TE
- 100 ng/µl λDNA
- 200x Dye
[編集] 手順
[編集] 標品を準備する
- 100 ng/µl λDNAを水または適当なバッファーで10倍に希釈して 10 ng/µl を作成する。20 µl程度あればよい。
- 同様に10 ng/µl から 1 ng/µl を作成する。
- 100, 10, 1 ng/µl それぞれを2倍に希釈して 50, 5, 0.5 ng/µl を作成する。それぞれ10 µl程度あればよい。
[編集] 定量
- 以下を混ぜる
| 1サンプル | 10サンプル | |
| H2O | 190µl | 1.9 ml |
| 20x TE | 10µl | 100 µl |
| 200x Dye | 0.5 µl | 5 µl |
- 200µlずつ分注する。
- 1µlサンプルを加える。よく混ぜる。
- 蛍光を測定する。490nm 励起、510-570nm 蛍光。
