TAクローニング
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(ページの作成:「====使用するキット==== ---- *「TArget Clone -Plus-」 (Toyobo) ＠-20℃フリーザー ====実験方法==== ---- :1. マイクロチューブにPCR産物と...」) |
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*「TArget Clone -Plus-」 (Toyobo) ＠-20℃フリーザー | *「TArget Clone -Plus-」 (Toyobo) ＠-20℃フリーザー | ||
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| − | + | ====(1) PCR産物の調製==== | |
| + | *精製したPCR産物を用いる場合、以下の要領で調製する。 | ||
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| + | !!! 添加量 !! 終濃度 | ||
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| + | | dH2O|| style="text-align:right;"|1.66 µl || | - | ||
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| + | | KOD -Plus- 10x Buffer || style="text-align:right;"| 0.9 µl|| | 1x (10倍希釈) | ||
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| + | | 25mM MgSO4 || style="text-align:right;"| 0.54 µl|| | 1.5mM (16.6倍希釈) | ||
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| + | | 2mM dNTPs || style="text-align:right;"| 0.9 µl || | 0.2mM (10倍希釈) | ||
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| + | | <b>精製PCR産物</b> || style="text-align:right;"| 5 µl || | - | ||
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| + | 最終濃度が1ｘ Taqバッファー、1.5mM MgCl2、0.2mM dNTPsとなるように試薬を添加して、以下の操作を継続してください。 | ||
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:1. 精製したいDNA（PCR産物など）をアガロースゲルで電気泳動する | :1. 精製したいDNA（PCR産物など）をアガロースゲルで電気泳動する | ||
::*泳動バッファーは使い回しではなく新しいものを使用 | ::*泳動バッファーは使い回しではなく新しいものを使用 | ||
| − | ::* | + | ::*サンプルをウェルに |
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| − | + | ====(2) 3'末端のdA付加反応==== | |
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| − | + | ::*泳動バッファーは使い回しではなく新しいものを使用 | |
| − | + | ::*サンプルをウェルに | |
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2020年2月19日 (水) 13:57時点における版
目次 |
使用するキット
- 「TArget Clone -Plus-」 (Toyobo) ＠-20℃フリーザー
実験方法
(1) PCR産物の調製
- 精製したPCR産物を用いる場合、以下の要領で調製する。
| 添加量 | 終濃度 | |
|---|---|---|
| dH2O | 1.66 µl | - |
| KOD -Plus- 10x Buffer | 0.9 µl | 1x (10倍希釈) |
| 25mM MgSO4 | 0.54 µl | 1.5mM (16.6倍希釈) |
| 2mM dNTPs | 0.9 µl | 0.2mM (10倍希釈) |
| 精製PCR産物 | 5 µl | - |
最終濃度が1ｘ Taqバッファー、1.5mM MgCl2、0.2mM dNTPsとなるように試薬を添加して、以下の操作を継続してください。
- 1. 精製したいDNA（PCR産物など）をアガロースゲルで電気泳動する
- 泳動バッファーは使い回しではなく新しいものを使用
- サンプルをウェルに
(2) 3'末端のdA付加反応
- 1. 精製したいDNA（PCR産物など）をアガロースゲルで電気泳動する
- 泳動バッファーは使い回しではなく新しいものを使用
- サンプルをウェルに
