ゲノム編集した植物のシークエンスの解析

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CRISPR-Cas9でゲノム編集した植物のシークエンスを解析し、変異を同定する方法。
 
CRISPR-Cas9でゲノム編集した植物のシークエンスを解析し、変異を同定する方法。
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T2世代で変異アリルをもつものを選抜する
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(Cas9を持たないものを選抜。pKIベクターを用いた場合、OLE-RFPが光らない種子)
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(genotyping:PCR+制限酵素処理で、切れないバンドを持つ個体を選抜)
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上記のPCR産物を、PCRに用いたプライマー各々でキャピラリーシークエンスを行う。
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この時に、シークエンスを解析し、変異を同定する方法。
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1)シーケンスアセンブリソフトウェア「ATGC」を起動
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・「ATGC」は共通PCにインストールしてあります
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・自分のPCで解析したい場合は、中部大学総合情報センターから「Genetyx」をダウンロードして使用
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http://www.isc.chubu.ac.jp/services/chubu/genetyx.html
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 「ATGC」は遺伝情報処理ソフトウェア「Genetyx」内にある
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 「ATGC」は初回使用時にパラメータを設定する必要がある(共通PCは設定済み)
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2)・キャピラリーシークエンスのファイル(拡張子.ab1のファイル)
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2021年11月2日 (火) 12:14時点における版

CRISPR-Cas9でゲノム編集した植物のシークエンスを解析し、変異を同定する方法。

T2世代で変異アリルをもつものを選抜する (Cas9を持たないものを選抜。pKIベクターを用いた場合、OLE-RFPが光らない種子) (genotyping:PCR+制限酵素処理で、切れないバンドを持つ個体を選抜) 上記のPCR産物を、PCRに用いたプライマー各々でキャピラリーシークエンスを行う。 この時に、シークエンスを解析し、変異を同定する方法。

1)シーケンスアセンブリソフトウェア「ATGC」を起動 ・「ATGC」は共通PCにインストールしてあります ・自分のPCで解析したい場合は、中部大学総合情報センターから「Genetyx」をダウンロードして使用 http://www.isc.chubu.ac.jp/services/chubu/genetyx.html  「ATGC」は遺伝情報処理ソフトウェア「Genetyx」内にある  「ATGC」は初回使用時にパラメータを設定する必要がある(共通PCは設定済み)

2)・キャピラリーシークエンスのファイル(拡張子.ab1のファイル)  ・

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