種まき

形質転換体のシロイヌナズナの種を作製したムラシゲ・スクーグ培地にまく。

用いる器具、試薬

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• 5%ブリーチ液 : 次亜塩素酸ナトリウム 5ml、10% Triton 200μl/ 100ml
• 0.1% Agar
• 滅菌水
• ピペット
• チップ
• ビーカー

実験方法

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※種子は形質転換体のため実験台や床に落ちないように、A４の用紙の上にろ紙を置き、その上で作業すること

1. マイクロチューブを数個用意し、それぞれの種類を必要な数取ってマイクロチューブの中に入れる。

2. 種の入ったマイクロチューブにそれぞれ

• 5%ブリーチ液 1mlずつ

加えて、ボルテックスミキサーにかけて、約5min放置。

ここからはクリーンベンチ内で操作すること

3. クリーンベンチ内にからのビーカーを入れ、

P-1000マイクロピペットで5%ブリーチ液をビーカーに捨てる。

4. それぞれに滅菌水を1ml加えて、蓋をしてチューブを振り、

チューブ内の滅菌水を1ml捨てる。

※この操作を5回繰り返し、種に付着したブリーチ液を出来るだけ取り除く。

5. 4の作業を5回したら、チューブ内で種子が

自由に動けるくらい(50μl程度)の滅菌水を加えて、

P-100又は200のマイクロピペットを用いて、培地に一粒ずつまいていく。

6. 全ての種をまき終わったら、プレートに日付、名前を書き

サージカルテープで蓋をとめて、アルミホイルで覆う。

7. 4℃で2日程置いたら、チャンバーへ移す。