DNAの電気泳動

アガロースを使った電気泳動

試薬

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• 1×TAE（50×TAEを50倍希釈）
• TAKARA　Agarose　
• 2×MightAmp　Buffer　　10µℓ　
• GR RED Loading buffer 6×
• DNAマーカー

アガロースゲルの作製と電気泳動

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2. 必要数サンプルが出来たら20μサンプルをPCRにかけて反応させる。

95℃　5分

95℃　1分

70or75℃　1分

72℃　4分

72℃　7分

35サイクル

12℃　∞

PCRが終ったら4℃で1日保存する

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増やしたDNAを電気泳動で確認する

1. 用意した１％アガロースゲルを電気泳動装置にセットし、1×TAEバッファーをゲルが浸るまで加える
2. アガロースゲルの一番左のウェルにDNAマーカー４μℓを20μピペットマンでアプライする。
3. 前日用意したPCR産物を別の8連マイクロチューブに4μℓ取りその中にGR RED Loading bufferを1μ加えて遠心する。（全量5μℓ）
4. できたサンプル5μℓ全量をアガロースゲルにそれぞれアプライする。
5. マーカー及びサンプルをすべてゲルにアプライしたら電気泳動を開始する（10分から20分程度）
6. 電気泳動が終了したらゲルを電気泳動装置から取り出しUV透過ゲルトレイに乗せ電気泳動ゲル撮影用デジタルカメラ遮光フード装置に持っていき撮影する。（結果を確認するまでゲルは捨てないこと）
7. 撮影したデータを持ってパソコンに保存、印刷する。