NucleoSpin Plasmid Quick Pureを使ったプラスミド抽出

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[編集] 試薬


  • NucleoSpin Plasmid QuickPure
A1(初めに使用する前に、RNase A (凍結乾燥品)のチューブに1 mlのBuffer A1を加えて完全に溶解し、溶解した溶液全量をBuffer A1のボトルに移す)
A2
A3
AQ(初めに使用する前に、Wash Buffer AQ(concentrate)に、4倍量のエタノール(96~100%)を添加する)
AE
  • 大腸菌の培養液

[編集] 実験方法


1. 培養液の集菌
培養液をマイクロチューブにデカンテーションで移す。
11,000gで室温、30秒遠心する。
上清をアスピレーターで除く。
2. 菌の溶解
ペレットにA1 250μlを加えボルテックスで完全に溶解する。
A2 250μlを加え、チューブを6〜8回反転(ボルテックスはしない)。
室温で5分静置する(透明になるまででよい)。
A3 300μlを加え、チューブを6〜8回反転(ボルテックスはしない)
3.ライセートの清澄化
11,000×g で室温、5分間遠心する。
4.カラムへの吸着
Collection Tubeにカラムをセットする。
上清をカラムに加える。
11,000×g で室温、1分間遠心する。
ろ液を捨て、カラムを同じCollection Tubeにセットする。
5. メンブレンの洗浄
AQ 450μlを加える。
11,000×g で室温、3分間遠心する。
6.DNAの溶出
カラムをマイクロチューブにセットする。
AE 50μlを加え、室温で1分間インキュベートする。
11,000×gで、1分間遠心する。
個人用ツール
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操作
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ツール