NucleoSpin Gel and PCR Clean-upを使ったDNA精製

試薬

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• NucleoSpin Gel and PCR Clean-up

NT1

NT3(初めに使用する前に、エタノールを加える）

NE

• PCR産物

実験方法（PCR産物の精製）

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1. マイクロチューブにPCR産物とPCR産物の2倍量のNT1を加える。

2. カラムをCollection Tube(2ml)にセットし、1の溶液をカラムに添加する。

11,000×g で、30秒遠心する。

ろ液を捨て、同じCollection Tubeにカラムをセットする。

3. NT3 700μlをカラムに添加する。

11,000×g で、30秒遠心する。

ろ液を捨て、同じCollection Tubeにカラムをセットする。

• このステップを2回行う。

4. カラムを11,000×gで、1分遠心しメンブレンを乾燥させる。

5. カラムをマイクロチューブにセットする。

NE15〜30μlを加え、室温で1分インキュベートする。

(PCR産物50μl･･･30μl , PCR産物20μl･･･20μl)

11,000×gで、1分遠心する。

実験方法（電気泳動後のゲルから抽出する場合）

• 電気泳動後のゲルからバンドを切り出して精製する場合は、以下の方法で行う

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1. 精製したいDNA（PCR産物など）をアガロースゲルで電気泳動する

• 泳動バッファーは使い回しではなく新しいものを使用
• サンプルをウェルにアプライする時は、1レーン以上間隔を開ける
• 電気泳動中は、光が当たらないように箱"Dark電気泳der"を泳動層にかぶせておく

※GR Redを取り込んだDNAは光が当たると変異が生じやすいため

2. 電気泳動中にヒートブロックを50℃にセットしておく

3. 　（以下、編集中）