インバースPCR

プライマーのリン酸化

試薬

• リン酸化するプライマーS(50μM)
• T4 PNK(Poly Nucleotide Kinase)
• T4 DNA Ligase Buffer

作成手順

1. リン酸化するプライマー(S)を 2μl、T4 PNKを 1μl、T4 DNA Ligase Bufferを 2μl加え、H2Oで全量を20μlにする。
2. それを 37℃で30分保温する。
3. 次に 65℃で20分保温する。
4. 最後に H2Oを 80μl加え、全量を 100μlにして、リン酸化済み 1μMのプライマーを作成する。
5. -20℃で保存する。