MultiNAを使った電気泳動

MultiNAを使った電気泳動

(1) 試薬

解析するDNA断片の長さに合わせて、「DNA-500（水色）」「DNA-2500（紫）」「DNA-12000（ピンク）」のうち適切なキットを選び、それに合わせた試薬を用いる

• (A) ラダー　：(2)で希釈したものを使う（-20℃）

MultiNA用試薬	ラダー
DNA-500	pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII))	※25bp DNA ラダー から変更
DNA-2500	pGEM DNA Markers
DNA-12000	2-Log DNA Ladder (0.1-10.0 kbp)

• (B) 希釈色素液 SYBR Gold　：(2)で希釈したものを使う（-20℃）
• (C) DNA マーカー溶液　：サイズに合わせたものを使用（-20℃）
• (D) DNA 分離バッファ　：サイズに合わせたものを使用 (4℃)

(2) ストック溶液の作成

• (A) ラダーを希釈する (希釈したラダーは-20℃で保存する)

1. pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII)) はTEで50倍に希釈する。
2. 2-Log DNA Ladder はTEで100倍に希釈する。
3. pGEM DNA Markers はTEで100倍に希釈する。

• (B) 希釈色素液

1. SYBR Gold 1µlとTE 99µlを混ぜ合わせる。
2. -20℃で保存する。

(3) 使用時に調整するもの

• 希釈色素液を分離バッファーで100倍に希釈する。必要量はサンプルを設定した後計算されるが、以下を参考に調整してもよい。

合計分析数	8分析以下	9-29分析	30-79分析	80-120分析
分離バッファーの量 (µl)	495	990	1980	2970
希釈色素液の量 (µl)	5	10	20	30

(4) 使用方法

1. 本体の電源を入れる。
2. 制御用コンピュータを起動する。MultiNAユーザーでログインして、MultiNA装置制御を起動する。
3. 制御ソフトの左上のMultiNAの文字がオレンジのときは本体と通信できていないのでメニューの「装置」-「接続」を実行する。

• 洗浄水の量を確認する。足りないときはミリQ水を補充する。
• 廃液が一杯になっていないか確認する。廃液はシンクに流す。

クリーニング

1. 前日使用していないときは全チップクリーニングをする。そうでないときはチップ洗浄を行う(2回)。

• チップクリーニング液＝Cleaning Solution RA　（試薬棚）
• チップ4枚、2回洗浄の場合：クリーニング液使用量＝2.6ml。所要時間＝70分。

測定

1. 制御ソフトでサンプルの登録を行う。

MultiNA画面の「新規登録」をクリック

使用するプロジェクト（キット、マーカー溶液の混合方法）を選択しOKをクリック

ウェルをクリック（緑色に変わる）

▶▶をクリック

サンプル名を入力

登録をクリック

2. 必要な分離バッファーとマーカーの量が表示されるので、分離バッファー（希釈色素液と混合したもの）は専用のチューブに、マーカーは0.5mlチューブに分注して、

それぞれの蓋を開けて所定の位置に設置する。分離バッファーとマーカーのラベルの色と装置内の置き場所の色が同じ。

• 分離バッファーは多めに作る。（足らない場合、ラン開始時にエラーが出る）

3. 自分のサンプルをセットする。サンプルは5µl以上必要で、そのうち1µlが使用される。

4. ラダーもセットする。ラダーは12µl程度必要。

5. サンプルを固定するための金属の網をかぶせる。

6. 蓋をする。

7. 制御用ソフトでランを開始する（▶をクリック）。泳動終了後に自動で洗浄を2回行うようにしておく。

後片付け

1. 一日の最後に全チップクリーニングを行う。チップクリーニングを行ったまま帰宅してよい。

データの解析

1. データは自動で保存される。保存場所は、デスクトップのショートカット「MultiNA-Project」内。プロジェクト毎のフォルダ内に、分析日時が付いたファイルが作られる。あとは、MultiNA Viewerで解析する