～2015/6/16 までのもの

イネ種子からDNA抽出し、精製する(～2015/6/16)

用いる器具・試薬

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試料・試薬

• 米粒 1粒

• PL1 400μl

• PC 450μl

• PW1 400μl

• PW2 900μl

• PE 100μl

• RNaseA 10μl

器具

• メタルコーン 1つ

• フィルター　2種類 (紫 ・緑 )

• エッペン管 1個

• 20μl用ピペットマン

• 200μl用ピペットマン

• 1000μl用ピペットマン

• MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)

• ヒートブロック

• 遠心分離機

実験方法

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1. 米粒(一粒)とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れて、MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)を用いて2000rpmで20秒×2回サンプルを破砕する

2. PL1 400μl と RNaseA 10μl を加える 注意：手袋着用して行うこと

3. ヒートブロック(65℃)で10分熱処理し、軽く遠心する

4. ピペットマンを使用して内液をフィルター(紫)に流しいれ、遠心分離機(11000xg)で2分遠心する

5. フィルターの上(層部分) を捨て、下(液部分)に PC 450μl を加え、ピペッティングする

6. ピペットマンで新しいフィルター(緑)に流しいれ、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する 注意：液量が多いため、2回に分けること

7. PW1 400μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する

8. PW2 700μl を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する

9. PW2 200μl を加え、遠心分離機(11000xg)で2分遠心する

フィルターの下(液部分)があふれるため、6～9の各工程が終わり次第、液を廃棄すること

10. フィルターの下(液部分) を捨て、上(層部分)をエッペン管につける

11. PE 50μl を加える

12. ヒートブロック(65℃)で5分熱処理し、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する

13. PE 50μl　を加え、遠心分離機(11000xg)で1分遠心する

14. フィルターを捨て、エッペン管を冷凍保存する。