DNAの電気泳動

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目次

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アガロースを使った電気泳動

試薬

  • 1×TAE(50×TAEを50倍希釈)
  • TAKARA Agarose
  • GR RED Loading buffer 6×
  • DNA分子量マーカー

アガロースゲルの作製

アガロースの濃度(W/V) DNAのサイズ(bp)
0.6% 1,000~20,000
0.7% 800~10,000
1.0% 500~7,000
1.2% 400~6,000
1.5% 200~3,000
2.0% 100~2,000
  • (目安) 1kb以下:1.5%、1kb以上:0.7%
  1. ゲルトレイ(ケース、トレイ、コーム)を準備する。
  2. ゲルトレイのサイズに応じたTAEを三角フラスコに分注する。 ※Mupid(大:2枚、小:4枚)の場合、200ml
  3. アガロースを量って入れる。
  4. 電子レンジでアガロースを完全に溶かす。
  5. 水道水でアガロース溶液を素手で持てるぐらいまで冷やす。
  6. トレイにアガロースを流し込む。ケースとトレイの間の空気を抜く。コームをさす。
  7. 固まるのを待つ。すぐに使わない場合は、固まってから冷蔵庫で保存

電気泳動

  1. サンプルと「10x泳動Buffer」(サンプルの1/10量)を混ぜる
  2. 泳動層にゲル(ゲル板はつけたまま)を入れ、TAEを満たす。
  3. サンプル10μlと左端にマーカー4μl(GR RED 1μl+マーカー4μl)をアプライし、100Vで泳動する。
  4. 泳動が終了したら、ゲルをUV透過ゲルトレイに乗せ、トランスイルミネーターでDNAを可視化する。写真を撮る。
  5. SDカードから撮影したデータを保存する。
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