MultiNAを使った電気泳動

(1) 試薬

解析するDNA断片の長さに合わせて、「DNA-500（水色）」「DNA-2500（紫）」「DNA-12000（ピンク）」のうち適切なキットを選び、それに合わせた試薬を用いる

(A) ラダー　：キットに合わせて下記から選択。(2)で希釈したものを使う（-20℃で保存）

MultiNA用試薬	ラダー
DNA-500	pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII))	※25bp DNA ラダーから変更
DNA-2500	pGEM DNA Markers
DNA-12000	2-Log DNA Ladder (0.1-10.0 kbp)

(B) 希釈色素液 SYBR Gold　：(2)で希釈したものを使う（-20℃で保存）
(C) DNA マーカー溶液　：サイズに合わせたものを使用（-20℃で保存）
(D) DNA 分離バッファ　：サイズに合わせたものを使用 (4℃で保存)

(2) ストック溶液の作成

(A) ラダーを希釈する (-20℃で保存)

(DNA-500) pUC19 HpaII Digest (pUC19/MspI(HpaII)) はTEで50倍に希釈する。
(DNA-2500) pGEM DNA Markers はTEで100倍に希釈する。
(DNA-12000) 2-Log DNA Ladder はTEで100倍に希釈する。

(B) 希釈色素液 (-20℃で保存)

SYBR Gold 1µlとTE 99µlを混ぜ合わせる。

(3) 使用時に調整するもの

希釈色素液を分離バッファーで100倍に希釈する。必要量はサンプルを設定した後計算されるが、以下を参考に調整してもよい。

合計分析数	8分析以下	9-29分析	30-79分析	80-120分析
分離バッファーの量 (µl)	495	990	1980	2970
希釈色素液の量 (µl)	5	10	20	30

(4) 使用方法

本体の電源を入れる。
制御用コンピュータを起動する。MultiNAユーザーでログインして、MultiNA装置制御を起動する。
制御ソフトの左上のMultiNAの文字がオレンジのときは本体と通信できていないのでメニューの「装置」-「接続」を実行する。

洗浄水の量を確認する。足りないときはElix水を補充する。

洗浄水が足らないとチップが詰まってしまうので、毎回のラン開始時、あるいは洗浄・クリーニング開始時には、必ずチェックする！

廃液が一杯になっていないか、廃液チューブが正しくセットされているかを確認する。廃液はシンクに流す。

クリーニング

前日に使用していない場合は、全チップクリーニングをする。（※前日に使用している場合は、チップ洗浄を行う(2回)）

「装置」タブ → 「チップクリーニング」 → 「全チップ」

チップクリーニング液＝Cleaning Solution RA　（試薬棚）
チップ4枚、2回洗浄の場合：クリーニング液使用量＝2.6ml。所要時間＝70分。

測定

1. 制御ソフトでサンプルの登録を行う。

1) MultiNA画面の「新規登録」をクリック

2) 使用するプロジェクト（キット、マーカー溶液の混合方法）を選択しOKをクリック

3) ウェルをクリック（緑色に変わる）

4) ▶▶をクリック

5) サンプル名を入力

6) 登録をクリック

2. 必要な分離バッファーとマーカーの量が表示されるので、分離バッファー（希釈色素液と混合したもの）は専用のチューブに、マーカーは0.5mlチューブに分注して、

それぞれの蓋を開けて所定の位置に設置する。分離バッファーとマーカーのラベルの色と装置内の置き場所の色が同じ。

分離バッファー、マーカー用の専用チューブは、MultiNAの下の引き出し内にあるものを使う
分離バッファーは多めに作る。（足らない場合、ラン開始時にエラーが出る）

3. 自分のサンプルをセットする。サンプルは5µl以上必要で、そのうち1µlが使用される。

4. ラダーもセットする。ラダーは12µl程度必要。

5. サンプルを固定するための金属の網をかぶせる。

6. 蓋をする。

7. 制御用ソフトでランを開始する（▶をクリック）。泳動終了後に自動で洗浄を2回行うようにしておく。

分離バッファー等の量が足らない場合、ラン開始してしばらく後にエラーが出る。その場合、補充したうえで再度ランを開始する

後片付け

一日の最後に全チップクリーニングを行う。チップクリーニングを行ったまま帰宅してよい（翌日に片付ける）。
- 装置内にセットしたチューブをすべて回収。電源を切る。
分離バッファー、マーカーの容器は水洗いして、風乾。

データの解析

データは自動で保存される。「MultiNA Viewer」で解析する

(保存場所) デスクトップのショートカット「MultiNA-Project」内のプロジェクト毎のフォルダ内。登録時の日付が付いたファイルが作られる。