DNAの定量 (Promega QuantiFluor)

DNA定量の原理

Promega社のQuantiFlourはDNAに特異的な蛍光色素を使ってDNAを定量する。

QuantiFlourに使われている蛍光色素はdsDNA (double stranded DNA 二本鎖DNA)と特異的に結合して蛍光を発する。 dsDNAと特異的に作用するため、不純物の影響を受けにくいのが最大の利点である。

また蛍光を用いるので吸光度よりはるかに高感度である(微量でも正確に測れる)。

試薬

• Promega社 QuantiFluor dsDNA System
  • 20x TE
  • 100 ng/µl λDNA
  • 200x Dye

手順

標品を準備する

1. 100 ng/µl λDNAを水または適当なバッファーで10倍に希釈して 10 ng/µl を作成する。20 µl程度あればよい。
2. 同様に10 ng/µl から 1 ng/µl を作成する。
3. 100, 10, 1 ng/µl それぞれを2倍に希釈して 50, 5, 0.5 ng/µl を作成する。それぞれ10 µl程度あればよい。

定量

1. 以下を混ぜる

	1サンプル	10サンプル
H2O	190µl	1.9 ml
20x TE	10µl	100 µl
200x Dye	0.5 µl	5 µl

1. 200µlずつ分注する。
2. 1µlサンプルを加える。よく混ぜる。
3. 蛍光を測定する。490nm 励起、510-570nm 蛍光。