NucleoSpin Plant IIを使ったDNA抽出

抽出したDNAの精製、再抽出 (キット内のBufferのPL1を使う場合)

1. 抽出したDNAに　PL1　400μl　を加えて混ぜ、

さらに　RNase A 10μl　を加えて　65℃で10分間置く( 手袋着用、RNaseAの扱いに注意 )。

2. キットのチューブにフィルター(紫のリング)をセットして、フィルターに１を全量移し、

11000×gで2分遠心する。(ろ過)

3. フィルターを外し　PC　450μl　を加え混ぜる。(DNAをカラムに固定しやすい状態にする)

4.別のチューブにカラム(緑のリング)をセットして、カラムに３を移す(最大700μl、液量が多いため、数回に分ける)。

11000×gで１分遠心する。(カラムにDNAを固定)

5.落ちた液を捨て、4.のカラムに　PW1　400μl　を加える。

11000×gで１分遠心する。(洗浄1回目)

6.落ちた液を捨て、5.のカラムに　PW2　700μl　を加える。

11000×gで１分遠心する。(洗浄2回目)

7.落ちた液を捨て、6.のカラムに　PW2　200μl　を加える。

11000×gで２分遠心する。(洗浄3回目)

8.1.5mlチューブに7.のカラムをセットして、PE　50μl　を加える。

65℃で5分間置き、11000×gで１分遠心する。(カラムからDNAを溶出)

9.もう一度カラムに　PE　50μl　を加えて、65℃で5分間置き、11000×gで１分遠心する。

計100μlのDNA液とする。

(精製後のDNA濃度を別室の吸光度計ではかっておくとよい)

(10.カラムは捨て、DNAは－20℃保存する。)