イネ種子からのDNA抽出方法

イネ種子からDNA抽出し、精製する

用いる器具・試薬

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試料・試薬

• 米粒 1粒

• SolⅠ 200μl

• SolⅡ 20μl

• SolⅢ 75μl

• クロロホルム 100μl

• イソプロパノール 100μl

• 70％エタノール 100μl

• H2O 100μl

器具

• メタルコーン 1つ

• エッペン管 1個

• 2mlサンプルチューブ 1個

• 20μl用ピペットマン

• 200μl用ピペットマン

• 1000μl用ピペットマン

• MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)

• ヒートブロック

• 遠心分離機

実験方法

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1. 米粒(一粒)とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れて、MULTI-BEADS SHOCKER(YASUIKIKAI)を用いて2000rpmで20秒×2回サンプルを破砕する

2. SolⅠ 200μl と SolⅡ 20μl と SolⅢ 75μl を加え、その都度、ボルテックスを行う

3. ヒートブロック(50℃)で15分熱処理する

4. クロロホルム 100μl を加え、遠心分離機(15000rpm)で5分遠心する

5. 上澄み液をエッペン管に回収し、イソプロパノール 100μl を加え、ボルテックス後、遠心分離機(15000rpm)で15分遠心する

6. 70％エタノール 100μl を加え、遠心分離機(15000rpm)で5分遠心する

7. 液層を吸い出し、H2O 100μlを加え、１晩冷蔵保存する

8. 冷凍保存する