大腸菌DH5aの形質転換

大腸菌DH5αの形質転換

• コンピテントセルは熱に弱いので、1)～5)の作業は、必ず氷上で行う

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1) -80℃のディープフリーザーからDH5aのコンピテントセルを取り出し、氷上で溶かす。

• コンピテントセルは、チューブ1本につき100µl。1本使い切らない場合は、使う分だけ新しいチューブにとって、残ったチューブには蓋に残量を記入して-80℃に戻す

2) 導入するDNA（プラスミド、ライゲーション反応後のDNA、等）を加えて、チップの先で混ぜる。

• 入れるDNAの量は、コンピテントセルの容量の1/10以下にする

3) 30分間氷上で保温する。

4) 42℃で30秒ヒートショックを与える。

5) すぐに氷上に戻し、2分置く。その後、コンピテントセルの10倍量のSOC培地を加える。

6) 37℃で1時間振とう培養する。

7) 「適切な抗生物質」の入ったLBプレートに撒く。　

• この操作は、実験台でバーナーを焚いて行う（無菌操作）。

• この時に用いるLBプレートは乾かしてから使う（クリーンベンチに蓋を開けた状態で10分ほど置く）

8) 一晩37℃で培養する。