NEBNext Multiplex Oligos for Illumina

短いPCR産物にシークエンス用のアダプターを付加してイルミナ用のライブラリを作成する。

シークエンス対象(PCR産物)はAを付加するTaq系の酵素を使用しているものとする。 もしAがついていないのであれば3'側にAを付ける必要がある。

PCR産物 x µl NEB ligation buffer y µl NEB Polynucleotide kinase z µl 合計 50µl

37℃で30分インキュベーション

Ligase x µl NEBNext Adapter 1µl (ストックは15µMで1.5µMに希釈したもの) 合計 83.5µl

20℃で15分インキュベーション

USER 3µlを加える

37℃で15分インキュベーション

100µl AMPureを加えて精製。20µlに溶出。

Index Primer Universal PCR Primer でPCRを行う。サイクル数は15回。

100µl AMPureを加えて精製。20µlに溶出。