イネ種子からのDNA抽出方法(～2015/6/16)

イネ種子からDNA抽出し、精製する(～2015/6/16)

用いる器具、試薬

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• 米 1粒

• PL1(buffer) 400ml

• RNaseA(RNA分解酵素) 10μ

• PC 450μl

• PW1 400μl

• PW2 900μl

• PE 100μl

• メタルコーン 1個

• 2mlサンプルチューブ 1個

• フィルター2種(紫・緑) 各1個

• フィルター用チューブ 2個

• エッペン管 1個

実験方法

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1. 米とメタルコーンを2mlサンプルチューブに入れ、破砕機(2000rpm・30秒×2回)で砕く。

2. 異なるチューブに1.の上澄みと、

• PL1(buffer) 400ml

• RNaseA(RNA分解酵素) 10μl 手袋着用

以上の2つを入れて、ヒートブロック(65℃・10分)で熱処理する。

3. 軽く遠心した後、紫のフィルターに入れ、遠心(11000xg・2分)し、紫のフィルターは破棄する。

4. ろ過したチューブに、

• PC 450μl

を加えて、ピペッティングし、緑のフィルターに2回に分けて入れ、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。

5. 緑のフィルターに、

• PW1 400μl

を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。

6. 緑のフィルターに、

• PW2 700μl

を加えて、遠心(11000xg・1分)し、残った液は破棄する。

7. 緑のフィルターに、

• PW2 200μl

を加えて、遠心(11000xg・2分)し、残った液は破棄する。

8. 緑のフィルターを新しいエッペン管につけ、

• PE 50μl

を加え、ヒートブロック(65℃・5分)で熱処理後、遠心(11000xg・1分)する。

9. もう一度 PE 50μl 加え、遠心(11000xg・1分)する。

この結果、フィルターで精製されたDNAがエッペン管に溶出する。緑のフィルターは破棄する。