ムラシゲ・スクーグ培地の作製

2017年9月25日 (月) 11:45時点における版

シロイヌナズナの育成のための培地作り

組成

• 1×MS塩 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　ストック　　 2×MS塩

(ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類)

• 0.05％ MES-KOH　pH5.7　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 5% Mes-KOH pH5.7

• 1×B5-Vitamin 1000×B5-Vitamin/100ml

• 1% Sucrose(スクロース)

• 0.3% Gellan Gum

• 10μM ルシフェリン

• 2ml (-20℃)

• 滅菌2号角シャーレ 15枚 1ml (-20℃)

実験方法

1. 1Lポリビーカーに

• 脱イオン水 約800ml

• MS Plant Salt Mixture(ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類) 4.6g(1袋)

• Sucrose(スクロース) 10g

• 1000×B5-Vitamin 1ml(-20℃)

• 0.5M MES-KOH 5ml(4℃)

以上の5つを入れて、スターラーにかける。

2. スターラーにかけながらpHメーターを使い、

1M KOH を少しずつ加えて、pHを5.7に合わせる。

3. 1Lにメスアップし、

• Gellan Gum 3g

を加え、アルミホイルでポリビーカーの蓋をしてオートクレーブ(121℃、15min)

ここからはクリーンベンチ内で操作すること

4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、

• ルシフェリン 2ml(-20℃)

を加える。

5. 滅菌2号角シャーレ15枚に分注し、固まるまで放置。

固まったらアルミホイルで包み、作製日、作製者を書き込んで

クリーンベンチから取り出して保管。