ムラシゲ・スクーグ培地の作製
提供: 鈴木研Wiki
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* 滅菌2号角シャーレ 15枚 1ml (-20℃) | * 滅菌2号角シャーレ 15枚 1ml (-20℃) | ||
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| + | !!! ストック濃度 !! 終濃度!! | ||
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| + | | MS塩|| style="text-align:right;"|2× || style="text-align:right;"| 1× | ||
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| + | | MES-KOH|| style="text-align:right;"| 5 ％|| style="text-align:right;"| 0.05 ％ | ||
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| + | | B5Vitamin || style="text-align:right;"| 1000×|| style="text-align:right;"| 1× | ||
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| + | | Sucrose || style="text-align:right;"| || style="text-align:right;"| 1 % | ||
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| + | | Gellan Gum || style="text-align:right;"| || style="text-align:right;"| 0.3 % | ||
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| + | | ルシフェリン || style="text-align:right;"| 0.1 μM|| style="text-align:right;"| 5 mM | ||
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=== 実験方法 === | === 実験方法 === | ||
2017年9月26日 (火) 13:48時点における版
シロイヌナズナの育成のための培地作り
組成
- 1×MS塩 ストック 2×MS塩
- (ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類)
- 0.05％ MES-KOH pH5.7 5% Mes-KOH pH5.7
- 1×B5-Vitamin 1000×B5-Vitamin/100ml
- 1% Sucrose(スクロース)
- 0.3% Gellan Gum
- 10μM ルシフェリン
- 2ml (-20℃)
- 滅菌2号角シャーレ 15枚 1ml (-20℃)
| ストック濃度 | 終濃度 | ||
|---|---|---|---|
| MS塩 | 2× | 1× | |
| MES-KOH | 5 ％ | 0.05 ％ | |
| B5Vitamin | 1000× | 1× | |
| Sucrose | 1 % | ||
| Gellan Gum | 0.3 % | ||
| ルシフェリン | 0.1 μM | 5 mM |
実験方法
- 1. 1Lポリビーカーに
- 脱イオン水 約800ml
- MS Plant Salt Mixture(ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類) 4.6g(1袋)
- Sucrose(スクロース) 10g
- 1000×B5-Vitamin 1ml(-20℃)
- 0.5M MES-KOH 5ml(4℃)
- 以上の5つを入れて、スターラーにかける。
- 2. スターラーにかけながらpHメーターを使い、
- 1M KOH を少しずつ加えて、pHを5.7に合わせる。
- 3. 1Lにメスアップし、
- Gellan Gum 3g
- を加え、アルミホイルでポリビーカーの蓋をしてオートクレーブ(121℃、15min)
ここからはクリーンベンチ内で操作すること
- 4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、
- ルシフェリン 2ml(-20℃)
- を加える。
- 5. 滅菌2号角シャーレ15枚に分注し、固まるまで放置。
- 固まったらアルミホイルで包み、作製日、作製者を書き込んで
- クリーンベンチから取り出して保管。
