シロイヌナズナの遺伝子型の判定
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(版間での差分)
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(→反応液の組成) |
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|2.5mM dNTP||1.6 µl | |2.5mM dNTP||1.6 µl | ||
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| + | |プライマー||終濃度0.2 µM | ||
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|プライマー||終濃度0.2 µM | |プライマー||終濃度0.2 µM | ||
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|DNA||1 µl | |DNA||1 µl | ||
| + | |- | ||
| + | |滅菌水|| up to 20 µl | ||
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|合計||20 µl | |合計||20 µl | ||
2017年10月11日 (水) 10:34時点における版
試薬
- 0.4M NaOH
- 0.1M Tris-HCl pH 6.8
DNA抽出
- 葉を一枚切り取り、サンプル破砕用チューブに入れる
- ビーズを一粒入れる
- 40 µlの0.4M NaOHを入れる
- 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う
- 遠心(フラッシュ)
- 200 µlの0.1M Tris-HClを加える
- よく混合し、遠心(フラッシュ)
- 上清を鋳型として用いる
PCR
反応液の組成
| 1サンプル | |
| ExTaq | 0.1 µl |
| Buffer | 2 µl |
| 2.5mM dNTP | 1.6 µl |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| DNA | 1 µl |
| 滅菌水 | up to 20 µl |
| 合計 | 20 µl |
反応
- 95℃ 3分
- 95℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 2分、のサイクルを35回
- 72℃ 5分
