ムラシゲ・スクーグ培地の作製
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=== 組成 === | === 組成 === | ||
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| − | + | *オートクレーブするもの | |
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| B5-Vitamin || style="text-align:right;"| 1000×|| style="text-align:right;"| 1× | | B5-Vitamin || style="text-align:right;"| 1000×|| style="text-align:right;"| 1× | ||
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| − | | Sucrose || style="text-align:right;"| || style="text-align:right;"| 2 % | + | | <font color="red"><b>Sucrose</b></font> || style="text-align:right;"| || style="text-align:right;"| 2 % |
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| − | | Gellan Gum || style="text-align:right;"| || style="text-align:right;"| 0.3 % | + | | <font color="red"><b>Gellan Gum</b></font> || style="text-align:right;"| || style="text-align:right;"| 0.3 % |
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| − | + | <font color="red">Sucroseの濃度</font>は実験によって異なるので、作製する前に確認する （<font color="red">Gellan Gum</font>の代わりに、植物培地用Agarを使う場合もある） | |
| − | + | ||
| − | : | + | :* 2×MS塩：MS塩1袋（1L用）を500mlの水に溶かしたもの （※MS塩＝ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類） |
| + | :* B5-Vitamin：1000×の溶液（1mlずつに分注。-20℃）を使う | ||
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::* ２×MS塩 | ::* ２×MS塩 | ||
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::* ５％ MES-KOH (pH 5.7) | ::* ５％ MES-KOH (pH 5.7) | ||
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::* Elix 水 | ::* Elix 水 | ||
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::* 1000×B5-Vitamin (-20℃) | ::* 1000×B5-Vitamin (-20℃) | ||
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::* 0.3％ Gellan Gum | ::* 0.3％ Gellan Gum | ||
| − | + | ::* 2 の培地 | |
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:: を入れ、メデュウムビンの蓋を少し緩め、オートクレーブ (121℃、15min) | :: を入れ、メデュウムビンの蓋を少し緩め、オートクレーブ (121℃、15min) | ||
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: 4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、 | : 4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、 | ||
| − | :: | + | :: 必要に応じて、抗生物質など を加える。 |
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:: ルシフェリン入りの培地はアルミホイルに包む | :: ルシフェリン入りの培地はアルミホイルに包む | ||
| − | :: 4℃で保管 ( | + | :: 4℃で保管 (プレートは逆さにする＝蓋が下になるように保管） |
2020年1月22日 (水) 10:35時点における版
シロイヌナズナの育成のための培地作り
組成
- オートクレーブするもの
| ストック濃度 | 終濃度 | |
|---|---|---|
| MS塩 | 2× | 1/2× |
| MES-KOH (pH 5.7) | 5 ％ | 0.05 ％ |
| B5-Vitamin | 1000× | 1× |
| Sucrose | 2 % | |
| Gellan Gum | 0.3 % |
Sucroseの濃度は実験によって異なるので、作製する前に確認する （Gellan Gumの代わりに、植物培地用Agarを使う場合もある）
- 2×MS塩：MS塩1袋（1L用）を500mlの水に溶かしたもの （※MS塩＝ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類）
- B5-Vitamin：1000×の溶液（1mlずつに分注。-20℃）を使う
- 抗生物質など、必要に応じていれるもの （オートクレーブ後に入れる）
| ストック濃度 | 終濃度 | 用途 | |
|---|---|---|---|
| カナマイシン | 50 mg/ml | 50 mg/L | 形質転換体の選抜 |
| ハイグロマイシン | 20 mg/ml | 10 mg/L | 形質転換体の選抜 |
| セフォタックス | 100 mg/ml | 200 mg/L | アグロバクテリウムの増殖抑制 |
| ルシフェリン | 5 mM | 10 μM | ルシフェラーゼ活性の測定 |
実験方法
- 1. メスシリンダーに
- ２×MS塩
- ５％ MES-KOH (pH 5.7)
- Elix 水
- Sucrose
- 1000×B5-Vitamin (-20℃)
- 以上の5つを入れて、スターラーにかける
- 2. Sucroceが溶けたら1Lにメスアップする
- 3. メデュウムビンに
- 0.3％ Gellan Gum
- 2 の培地
- を入れ、メデュウムビンの蓋を少し緩め、オートクレーブ (121℃、15min)
ここからはクリーンベンチ内で操作すること
- 4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、
- 必要に応じて、抗生物質など を加える。
- 5. 滅菌2号角シャーレに分注し、固まるまで放置。
- 固まったらビニール袋に入れ、培地の種類、作製日、作製者を書く
- ルシフェリン入りの培地はアルミホイルに包む
- 4℃で保管 (プレートは逆さにする＝蓋が下になるように保管）
