シロイヌナズナの遺伝子型の判定
提供: 鈴木研Wiki
(版間での差分)
(→DNA抽出) |
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=== 反応 === | === 反応 === | ||
| − | # 95℃ 3分 | + | # 95℃ 3分 |
| − | # 95℃ | + | # [95℃ 45秒、(アニーリング)55℃ 45秒、(伸長反応)72℃ 2分] のサイクルを35回 |
| − | # 72℃ 5分 | + | # 72℃ 5分 (→ 4℃ ∞) |
2020年4月1日 (水) 15:33時点における版
試薬
- 0.4M NaOH
- 0.1M Tris-HCl pH 6.8
DNA抽出 マルチビーズショッカー
- 葉を一枚切り取り、サンプル破砕用チューブに入れる
- ビーズを一粒入れる
- 40 µlの0.4M NaOHを入れる
- 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う
- 遠心(フラッシュ)
- 200 µlの0.1M Tris-HClを加える
- よく混合し、遠心(フラッシュ)
- 上清を鋳型として用いる
PCR
反応液の組成
| 1サンプル | |
| ExTaq | 0.1 µl |
| 10×ExTaq Buffer | 2 µl |
| 2.5mM dNTP | 1.6 µl |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| DNA | 1 µl |
| 滅菌水 | up to 20 µl |
| 合計 | 20 µl |
反応
- 95℃ 3分
- [95℃ 45秒、(アニーリング)55℃ 45秒、(伸長反応)72℃ 2分] のサイクルを35回
- 72℃ 5分 (→ 4℃ ∞)
