各種試薬の作製方法（覚え書き）
提供: 鈴木研Wiki
(版間での差分)
| 36行: | 36行: | ||
| myo-イノシトール || 10 g || 4 g | | myo-イノシトール || 10 g || 4 g | ||
|} | |} | ||
| + | |||
| + | |||
| + | ==== バスタ（グルホシネート） ==== | ||
| + | 形質転換後の植物の選抜に使う抗生物質の一種 | ||
| + | |||
| + | {| class='wikitable' | ||
| + | | - || グルホシネート濃度 || 場所 || 備考 | ||
| + | |- | ||
| + | | 原液 || 18.5% || 試薬棚に保存（50mlチューブに入っている）|| | ||
| + | |- | ||
| + | |ストック溶液 || 1% || -20℃の抗生物質ケース。 || 原液を18.5倍希釈して、フィルター滅菌 | ||
| + | |} | ||
| + | * 培地には、ストック溶液を1/1000量入れる（終濃度：0.001%） | ||
| + | |||
2024年1月19日 (金) 11:00時点における版
目次 |
SOC培地 もどき （LB培地+20mMグルコース）
大腸菌等の形質転換時に使うSOC培地は、以下のもので代用
- 液体LB培地を作製 （LB broth：2g/100ml ＠200mlビーカー）→ オートクレーブ
- (クリーンベンチにて) 2M グルコース溶液（オートクレーブ済み） を1ml（1/100量）添加 ※終濃度:20mM
- 1.5mlチューブに1mlずつ分注 （100本できる）
- 分注には、分注器＋コンビチップを使うと便利
- 1.5mlチューブ100本≒大コーヒー瓶1本分 → ユニパックG-4・1袋に回収
種子滅菌液
（5%ブリーチ液）: 次亜塩素酸ナトリウム 5ml、10% Triton 200μl / 100ml
MES-KOH (5%, pH5.7)
MES 10g / 200ml で作製
- MES 10gを量り取って、適量の水（150ml程度）で溶解
- MESが溶解したら、1M KOHでpH5.7に合わせる
- 200mlまでメスアップし、この段階で再びpHを調節する
- pH調整で添加する1M KOHは13～16ml程度と量が多いので、最初の溶解時には、この分を考慮する
- メスアップするとpHが変動する（下がる）ため、最終容量でのpH調整が必須。（この時は最初よりpHが変動しやすいので注意）
1000x B5ビタミン
以下の組成で作製。1.5mlチューブに1mlずつ分注して-20℃保存 （分注には、分注器を使用）
| 100 ml | 40 ml | |
| ニコチン酸 | 100 mg | 40 mg |
| チアミンHCl | 1 g | 400 mg |
| ピリドキシンHCl | 100 mg | 40 mg |
| myo-イノシトール | 10 g | 4 g |
バスタ（グルホシネート）
形質転換後の植物の選抜に使う抗生物質の一種
| - | グルホシネート濃度 | 場所 | 備考 |
| 原液 | 18.5% | 試薬棚に保存（50mlチューブに入っている） | |
| ストック溶液 | 1% | -20℃の抗生物質ケース。 | 原液を18.5倍希釈して、フィルター滅菌 |
- 培地には、ストック溶液を1/1000量入れる（終濃度：0.001%）
50 x TAE
※現在は、50xTAEを購入しているのでこの方法では作製していないが、記録として記載
| 試薬 | 分量 |
| Tris | 242 g |
| 酢酸 | 57.1 ml |
| EDTA・2Na | 18.6 g |
以上のものを混ぜて、1Lにメスアップする。
