シロイヌナズナの遺伝子型の判定
提供: 鈴木研Wiki
(版間での差分)
| 6行: | 6行: | ||
== DNA抽出 == | == DNA抽出 == | ||
| − | # | + | # サンプル破砕用チューブに40 µlの0.4M NaOHを入れる |
# 葉を一枚切り取り、チューブに入れる | # 葉を一枚切り取り、チューブに入れる | ||
# ビーズを一粒入れる | # ビーズを一粒入れる | ||
# 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う | # 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う | ||
# 遠心(フラッシュ) | # 遠心(フラッシュ) | ||
| − | # | + | # 200 µlの0.1M Tris-HClを加える |
# よく混合し、遠心(フラッシュ) | # よく混合し、遠心(フラッシュ) | ||
# 上清を鋳型として用いる | # 上清を鋳型として用いる | ||
| 29行: | 29行: | ||
|- | |- | ||
|DNA||1 µl | |DNA||1 µl | ||
| + | |- | ||
| + | |合計||20 µl | ||
|} | |} | ||
2016年11月29日 (火) 15:16時点における版
試薬
- 0.4M NaOH
- 0.1M Tris-HCl pH 6.8
DNA抽出
- サンプル破砕用チューブに40 µlの0.4M NaOHを入れる
- 葉を一枚切り取り、チューブに入れる
- ビーズを一粒入れる
- 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う
- 遠心(フラッシュ)
- 200 µlの0.1M Tris-HClを加える
- よく混合し、遠心(フラッシュ)
- 上清を鋳型として用いる
PCR
反応液の組成
| 1サンプル | |
| ExTaq | 0.1 µl |
| Buffer | 2 µl |
| 2.5mM dNTP | 1.6 µl |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| DNA | 1 µl |
| 合計 | 20 µl |
反応
- 95℃ 3分
- 95℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 2分、のサイクルを35回
- 72℃ 5分
