各種試薬の作製方法（覚え書き）
提供: 鈴木研Wiki
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* 培地には、ストック溶液を1/1000量入れる（グルホシネート終濃度：0.001%） | * 培地には、ストック溶液を1/1000量入れる（グルホシネート終濃度：0.001%） | ||
| + | ==== 抗生物質・全般 ==== | ||
| + | [ムラシゲ・スクーグ培地の作製]を参照 | ||
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| + | !!! 用途 !! 終濃度 !! ストック濃度 | ||
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| + | | カナマイシン (Km) || 形質転換体の選抜|| style="text-align:right;"|50 mg/L || style="text-align:right;"| 50 mg/ml | ||
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| + | | ハイグロマイシン ('''Hyg''') || 形質転換体の選抜（drol1以外の野生型など）|| style="text-align:right;"| 20 mg/L || style="text-align:right;"| 20 mg/ml | ||
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| + | | ハイグロマイシン ('''Hyg''') || 形質転換体の選抜（drol1） || style="text-align:right;"| 10 mg/L || style="text-align:right;"| 20 mg/ml | ||
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| + | | セフォタックス ('''Cef''') || アグロバクテリウムの増殖抑制 || style="text-align:right;"| 100 mg/L || style="text-align:right;"| 100 mg/ml | ||
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| + | | ルシフェリン || ルシフェラーゼ活性の測定 || style="text-align:right;"| 10 μM || style="text-align:right;"| 5 mM | ||
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| + | * 上記の「ストック濃度」で水に溶解（5mlチューブ使用） | ||
| + | * （クリーンベンチ内で）フィルター滅菌（10mlシリンジ＋0.22umフィルター）⇒オートクレーブ済みの1.5mlチューブに分注 | ||
==== 50 x TAE ==== | ==== 50 x TAE ==== | ||
2024年3月12日 (火) 15:41時点における版
目次 |
SOC培地 もどき （LB培地+20mMグルコース）
大腸菌等の形質転換時に使うSOC培地は、以下のもので代用
- 液体LB培地を作製 （LB broth：2g/100ml ＠200mlビーカー）→ オートクレーブ
- (クリーンベンチにて) 2M グルコース溶液（オートクレーブ済み） を1ml（1/100量）添加 ※終濃度:20mM
- 1.5mlチューブに1mlずつ分注 （100本できる）
- 分注には、分注器＋コンビチップを使うと便利
- 1.5mlチューブ100本≒大コーヒー瓶1本分 → ユニパックG-4・1袋に回収
種子滅菌液
（5%ブリーチ液）: 次亜塩素酸ナトリウム 5ml、10% Triton 200μl / 100ml
MES-KOH (5%, pH5.7)
MES 10g / 200ml で作製
- MES 10gを量り取って、適量の水（150ml程度）で溶解
- MESが溶解したら、1M KOHでpH5.7に合わせる
- 200mlまでメスアップし、この段階で再びpHを調節する
- pH調整で添加する1M KOHは13～16ml程度と量が多いので、最初の溶解時には、この分を考慮する
- メスアップするとpHが変動する（下がる）ため、最終容量でのpH調整が必須。（この時は最初よりpHが変動しやすいので注意）
1000x B5ビタミン
以下の組成で作製。1.5mlチューブに1mlずつ分注して-20℃保存 （分注には、分注器を使用）
| 100 ml | 40 ml | |
| ニコチン酸 | 100 mg | 40 mg |
| チアミンHCl | 1 g | 400 mg |
| ピリドキシンHCl | 100 mg | 40 mg |
| myo-イノシトール | 10 g | 4 g |
バスタ（グルホシネート）
形質転換後の植物の選抜に使う抗生物質の一種
| グルホシネート濃度 | 場所 | 備考 | |
|---|---|---|---|
| 原液 | 18.5% | 試薬棚に保存（50mlチューブに入っている） | 名大生化からもらった |
| ストック溶液 | 1% | -20℃の抗生物質ケース。 | 原液を18.5倍希釈して、フィルター滅菌 |
- 培地には、ストック溶液を1/1000量入れる（グルホシネート終濃度：0.001%）
抗生物質・全般
[ムラシゲ・スクーグ培地の作製]を参照
| 用途 | 終濃度 | ストック濃度 | |
|---|---|---|---|
| カナマイシン (Km) | 形質転換体の選抜 | 50 mg/L | 50 mg/ml |
| ハイグロマイシン (Hyg) | 形質転換体の選抜（drol1以外の野生型など） | 20 mg/L | 20 mg/ml |
| ハイグロマイシン (Hyg) | 形質転換体の選抜（drol1） | 10 mg/L | 20 mg/ml |
| セフォタックス (Cef) | アグロバクテリウムの増殖抑制 | 100 mg/L | 100 mg/ml |
| ルシフェリン | ルシフェラーゼ活性の測定 | 10 μM | 5 mM |
- 上記の「ストック濃度」で水に溶解（5mlチューブ使用）
- （クリーンベンチ内で）フィルター滅菌（10mlシリンジ＋0.22umフィルター）⇒オートクレーブ済みの1.5mlチューブに分注
50 x TAE
※現在は、50xTAEを購入しているのでこの方法では作製していないが、記録として記載
| 試薬 | 分量 |
| Tris | 242 g |
| 酢酸 | 57.1 ml |
| EDTA・2Na | 18.6 g |
以上のものを混ぜて、1Lにメスアップする。
