シロイヌナズナの遺伝子型の判定
提供: 鈴木研Wiki
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# 葉を一枚切り取り、チューブに入れる | # 葉を一枚切り取り、チューブに入れる | ||
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# 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う | # 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う | ||
# 遠心(フラッシュ) | # 遠心(フラッシュ) | ||
2017年9月21日 (木) 16:37時点における版
試薬
- 0.4M NaOH
- 0.1M Tris-HCl pH 6.8
DNA抽出
- 葉を一枚切り取り、チューブに入れる
- ビーズを一粒入れる
- サンプル破砕用チューブに40 µlの0.4M NaOHを入れる
- 2000rpmで5秒オン、2秒オフのサイクルを2回行う
- 遠心(フラッシュ)
- 200 µlの0.1M Tris-HClを加える
- よく混合し、遠心(フラッシュ)
- 上清を鋳型として用いる
PCR
反応液の組成
| 1サンプル | |
| ExTaq | 0.1 µl |
| Buffer | 2 µl |
| 2.5mM dNTP | 1.6 µl |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| DNA | 1 µl |
| 合計 | 20 µl |
反応
- 95℃ 3分
- 95℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 2分、のサイクルを35回
- 72℃ 5分
