シロイヌナズナの遺伝子型の判定
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(版間での差分)
(ページの作成:「== 試薬 == - 0.4M NaOH - 0.1M Tris-HCl pH 6.8 * DNA抽出 [#j64f9f7e] + サンプル破砕用チューブに40μlの0.4M NaOHを入れる + 葉を一枚切り取り、...」) |
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== 試薬 == | == 試薬 == | ||
| − | + | * 0.4M NaOH | |
| − | + | * 0.1M Tris-HCl pH 6.8 | |
| − | + | == DNA抽出 == | |
| − | + | * サンプル破砕用チューブに40μlの0.4M NaOHを入れる | |
| − | + | * 葉を一枚切り取り、チューブに入れる | |
| − | + | * ビーズを一粒入れる | |
| − | + | * 20Hzで1分間破砕、を2回行う | |
| − | + | * 遠心(フラッシュ) | |
| − | + | * 200μlの0.1M Tris-HClを加える | |
| − | + | * よく混合し、遠心(フラッシュ) | |
| − | + | * 上清を鋳型として用いる | |
| − | + | == PCR == | |
| − | + | === 反応液の組成 === | |
| − | |ExTaq|0. | + | {| class='wikitable' |
| − | |Buffer| | + | |||1サンプル |
| − | |2.5mM dNTP|1. | + | |- |
| − | |プライマー|終濃度0. | + | |ExTaq||0.1 µl |
| − | |DNA| | + | |- |
| − | | | + | |Buffer||0.1 µl |
| + | |- | ||
| + | |2.5mM dNTP||1.6 µl | ||
| + | |- | ||
| + | |プライマー||終濃度0.2 µM | ||
| + | |- | ||
| + | |DNA||0.1 µll | ||
| + | |} | ||
| − | + | === 反応 === | |
| − | + | *95℃ 3分 | |
| − | + | *95℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 2分、のサイクルを35回 | |
| − | + | *72℃ 5分 | |
2016年11月29日 (火) 13:15時点における版
試薬
- 0.4M NaOH
- 0.1M Tris-HCl pH 6.8
DNA抽出
- サンプル破砕用チューブに40μlの0.4M NaOHを入れる
- 葉を一枚切り取り、チューブに入れる
- ビーズを一粒入れる
- 20Hzで1分間破砕、を2回行う
- 遠心(フラッシュ)
- 200μlの0.1M Tris-HClを加える
- よく混合し、遠心(フラッシュ)
- 上清を鋳型として用いる
PCR
反応液の組成
| 1サンプル | |
| ExTaq | 0.1 µl |
| Buffer | 0.1 µl |
| 2.5mM dNTP | 1.6 µl |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| DNA | 0.1 µll |
反応
- 95℃ 3分
- 95℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 2分、のサイクルを35回
- 72℃ 5分
