シロイヌナズナの遺伝子型の判定
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== DNA抽出 == | == DNA抽出 == | ||
| − | + | # サンプル破砕用チューブに40μlの0.4M NaOHを入れる | |
| − | + | # 葉を一枚切り取り、チューブに入れる | |
| − | + | # ビーズを一粒入れる | |
| − | + | # 20Hzで1分間破砕、を2回行う | |
| − | + | # 遠心(フラッシュ) | |
| − | + | # 200μlの0.1M Tris-HClを加える | |
| − | + | # よく混合し、遠心(フラッシュ) | |
| − | + | # 上清を鋳型として用いる | |
== PCR == | == PCR == | ||
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=== 反応 === | === 反応 === | ||
| − | + | # 95℃ 3分 | |
| − | + | # 95℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 2分、のサイクルを35回 | |
| − | + | # 72℃ 5分 | |
2016年11月29日 (火) 13:20時点における版
試薬
- 0.4M NaOH
- 0.1M Tris-HCl pH 6.8
DNA抽出
- サンプル破砕用チューブに40μlの0.4M NaOHを入れる
- 葉を一枚切り取り、チューブに入れる
- ビーズを一粒入れる
- 20Hzで1分間破砕、を2回行う
- 遠心(フラッシュ)
- 200μlの0.1M Tris-HClを加える
- よく混合し、遠心(フラッシュ)
- 上清を鋳型として用いる
PCR
反応液の組成
| 1サンプル | |
| ExTaq | 0.1 µl |
| Buffer | 2 µl |
| 2.5mM dNTP | 1.6 µl |
| プライマー | 終濃度0.2 µM |
| DNA | 0.1 µll |
反応
- 95℃ 3分
- 95℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 2分、のサイクルを35回
- 72℃ 5分
