ムラシゲ・スクーグ培地の作製

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(組成)
(実験方法)
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: 1. 1Lポリビーカーに
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: 1. メスシリンダーに
  
::*脱イオン水  約800ml
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::* 2×MS塩
  
::* MS Plant Salt Mixture(ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類)  4.6g(1袋)
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::* 5% MES-KOH (pH5.7)
  
::* Sucrose(スクロース)  10g
+
::* Elix水
  
::* 1000×B5-Vitamin  1ml(-20℃)
+
::* 2% Sucrose
  
::* 0.5M MES-KOH  5ml(4℃)
+
::* 1000×B5-Vitamin(-20℃)
  
:: 以上の5つを入れて、スターラーにかける。
+
:: 以上の5つを入れて、スターラーにかける
  
  
: 2. スターラーにかけながらpHメーターを使い、
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: 2. Sucroceが溶けたら1Lにメスアップする
  
:: 1M KOH を少しずつ加えて、pHを5.7に合わせる。
 
  
 +
: 3. メデュウムビンに
  
: 3. 1Lにメスアップし、
+
::* 0.3% Gellan Gum
  
::* Gellan Gum 3g
+
::* 2 のMS塩
  
:: を加え、アルミホイルでポリビーカーの蓋をしてオートクレーブ(121℃、15min)
+
:: を入れ、メデュウムビンの蓋を少し緩め、オートクレーブ(121℃、15min)
  
  
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: 4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、
 
: 4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、
  
::* ルシフェリン 2ml(-20℃)
+
::* 0.1 μM ルシフェリン(-20℃)
  
 
:: を加える。
 
:: を加える。
  
  
: 5. 滅菌2号角シャーレ15枚に分注し、固まるまで放置。
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: 5. 滅菌2号角シャーレに分注し、固まるまで放置。
  
:: 固まったらアルミホイルで包み、作製日、作製者を書き込んで
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:: 固まったらビニール袋に入れ、培地の種類、作製日、作製者を書く
  
:: クリーンベンチから取り出して保管。
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:: ルシフェリン入りの培地はアルミホイルに包み、クリーンベンチから取り出して保管。

2017年9月26日 (火) 14:43時点における版

シロイヌナズナの育成のための培地作り

組成



ストック濃度 終濃度
MS塩
MES-KOH 5 % 0.05 %
B5-Vitamin 1000×
Sucrose 1 %
Gellan Gum 0.3 %
ルシフェリン 0.1 μM 5 mM
MS塩:ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類
1000×:1000×B5-Vitamin/100ml

実験方法


1. メスシリンダーに
  • 2×MS塩
  • 5% MES-KOH (pH5.7)
  • Elix水
  • 2% Sucrose
  • 1000×B5-Vitamin(-20℃)
以上の5つを入れて、スターラーにかける


2. Sucroceが溶けたら1Lにメスアップする


3. メデュウムビンに
  • 0.3% Gellan Gum
  • 2 のMS塩
を入れ、メデュウムビンの蓋を少し緩め、オートクレーブ(121℃、15min)


ここからはクリーンベンチ内で操作すること


4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、
  • 0.1 μM ルシフェリン(-20℃)
を加える。


5. 滅菌2号角シャーレに分注し、固まるまで放置。
固まったらビニール袋に入れ、培地の種類、作製日、作製者を書く
ルシフェリン入りの培地はアルミホイルに包み、クリーンベンチから取り出して保管。
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