ムラシゲ・スクーグ培地の作製
提供: 鈴木研Wiki
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| − | !!! ストック濃度 !! 終濃度 | + | !!! ストック濃度 !! 終濃度 !! 用途 |
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| − | | カナマイシン|| style="text-align:right;"|50 mg/ml || style="text-align:right;"| 50 mg/L | + | | カナマイシン|| style="text-align:right;"|50 mg/ml || style="text-align:right;"| 50 mg/L || 形質転換体の選抜 |
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| − | | ハイグロマイシン || style="text-align:right;"| 20 mg/ml|| style="text-align:right;"| 10 mg/L | + | | ハイグロマイシン || style="text-align:right;"| 20 mg/ml|| style="text-align:right;"| 10 mg/L || 形質転換体の選抜 |
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| − | | セフォタックス || style="text-align:right;"| 100 mg/ml|| style="text-align:right;"| 200 mg/L | + | | セフォタックス || style="text-align:right;"| 100 mg/ml|| style="text-align:right;"| 200 mg/L || アグロバクテリウムの増殖抑制 |
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| − | | ルシフェリン || style="text-align:right;"| 5 mM || style="text-align:right;"| 10 μM | + | | ルシフェリン || style="text-align:right;"| 5 mM || style="text-align:right;"| 10 μM || ルシフェラーゼ活性の測定 |
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=== 実験方法 === | === 実験方法 === | ||
2019年8月26日 (月) 11:18時点における版
シロイヌナズナの育成のための培地作り
組成
| ストック濃度 | 終濃度 | |
|---|---|---|
| MS塩 | 2× | 1/2× |
| MES-KOH (pH 5.7) | 5 ％ | 0.05 ％ |
| B5-Vitamin | 1000× | 1× |
| Sucrose | 2 % | |
| Gellan Gum | 0.3 % |
- MS塩：ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類
- 2×MS塩：MS塩1袋（1L用）を500mlの水に溶かしたもの
- 1000×：1000×B5-Vitamin/100ml
- 抗生物質など、必要に応じていれるもの （オートクレーブ後に入れる）
| ストック濃度 | 終濃度 | 用途 | |
|---|---|---|---|
| カナマイシン | 50 mg/ml | 50 mg/L | 形質転換体の選抜 |
| ハイグロマイシン | 20 mg/ml | 10 mg/L | 形質転換体の選抜 |
| セフォタックス | 100 mg/ml | 200 mg/L | アグロバクテリウムの増殖抑制 |
| ルシフェリン | 5 mM | 10 μM | ルシフェラーゼ活性の測定 |
実験方法
- 1. メスシリンダーに
- ２×MS塩
- ５％ MES-KOH (pH 5.7)
- Elix 水
- ２％ Sucrose
- 1000×B5-Vitamin (-20℃)
- 以上の5つを入れて、スターラーにかける
- 2. Sucroceが溶けたら1Lにメスアップする
- 3. メデュウムビンに
- 0.3％ Gellan Gum
- 2 のMS塩
- を入れ、メデュウムビンの蓋を少し緩め、オートクレーブ (121℃、15min)
ここからはクリーンベンチ内で操作すること
- 4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、
- 必要に応じて、抗生物質など
- を加える。
- 5. 滅菌2号角シャーレに分注し、固まるまで放置。
- 固まったらビニール袋に入れ、培地の種類、作製日、作製者を書く
- ルシフェリン入りの培地はアルミホイルに包む
- 4℃で保管 (プレートは逆さにする）
