ムラシゲ・スクーグ培地の作製

シロイヌナズナの育成のための培地作り

組成

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	ストック濃度	終濃度
MS塩	2×	1×
MES-KOH	5 ％	0.05 ％
B5-Vitamin	1000×	1×
Sucrose		1 %
Gellan Gum		0.3 %
ルシフェリン	0.1 μM	5 mM

MS塩：ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類

1000×：1000×B5-Vitamin/100ml

実験方法

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1. 1Lポリビーカーに

• 脱イオン水 約800ml

• MS Plant Salt Mixture(ムラシゲ・スクーグ培地用混合塩類) 4.6g(1袋)

• Sucrose(スクロース) 10g

• 1000×B5-Vitamin 1ml(-20℃)

• 0.5M MES-KOH 5ml(4℃)

以上の5つを入れて、スターラーにかける。

2. スターラーにかけながらpHメーターを使い、

1M KOH を少しずつ加えて、pHを5.7に合わせる。

3. 1Lにメスアップし、

• Gellan Gum 3g

を加え、アルミホイルでポリビーカーの蓋をしてオートクレーブ(121℃、15min)

ここからはクリーンベンチ内で操作すること

4. オートクレーブ後、スターラーで撹拌しながら冷まし、

• ルシフェリン 2ml(-20℃)

を加える。

5. 滅菌2号角シャーレ15枚に分注し、固まるまで放置。

固まったらアルミホイルで包み、作製日、作製者を書き込んで

クリーンベンチから取り出して保管。